天涯海角

My Web Home

Monthly Archives: 5月 2012

11种常见食物空腹吃了很“要命”

 “饥不择食”,是说人饿的时候,食欲强烈。但是如果抓到什么吃什么,急于填饱肚子对健康是非常有害的,因为有些食物是不宜空腹食用的,否则会给你的健康埋下隐患。
一、牛奶、豆浆
  “饥不择食”,是说人饿的时候,食欲强烈。但是如果抓到什么吃什么,急于填饱肚子对健康是非常有害的,因为有些食物是不宜空腹食用的,否则会给你的健康埋下隐患。
  这两种食物中含有大量的蛋白质,空腹饮用,蛋白质将“被迫”转化为热能消耗掉,起不到营养滋补作用。正确的饮用方法是与点心、面饼等含面粉的食品同食,或餐后两小时再喝,或睡前喝均可。
二、酸奶
  空腹饮用酸奶,会使酸奶的保健作用减弱,而饭后两小时饮用,或睡前喝,既有滋补保健、促进消化作用,又有排气通便作用。
三、白酒
  空腹饮酒会刺激胃黏膜,久之易引起胃炎、胃溃疡等疾病。另外,人空腹时,本身血糖就低,此时饮酒,人体很快出现低血糖,脑组织会因缺乏葡萄糖的供应而发生功能性障碍,出现头晕、心悸、出冷汗及饥饿感,严重者会发生低血糖昏迷。
四、茶
  空腹饮茶能稀释胃液,降低消化功能,还会引起“茶醉”,表现为心慌、头晕、头痛、乏力、站立不稳等。
五、糖
  糖是一种极易消化吸收的食品,空腹大量吃糖,人体短时间内不能分泌足够的胰岛素来维持血糖的正常值,使血液中的血糖骤然升高容易导致眼疾。而且糖属酸性食品,空腹吃糖还会破坏机体内的酸碱平衡和各种微生物的平衡,对健康不利。
六、柿子、西红柿
  含有较多的果胶、单宁酸,上述物质与胃酸发生化学反应生成难以溶解的凝胶块,易形成胃结石。
七、香蕉
  香蕉中有较多的镁元素,空腹吃香蕉会使人体中的镁骤然升高而破坏人体血液中的镁钙平衡,对心血管产生抑制作用,不利于身体健康。
八、山楂、桔子
  含有大量的有机酸、果酸、山楂酸、枸橼酸等,空腹食用,会使胃酸猛增,对胃黏膜造成不良刺激,使胃胀满、嗳气、吐酸水。
九、大蒜
  大蒜含有强烈辛辣味的大蒜素,空腹食蒜,会对胃黏膜、肠壁造成强烈的刺激,引起胃肠痉挛、绞痛。
十、白薯
  白薯中含有单宁和胶质,会刺激胃壁分泌更多胃酸,引起烧心等不适感。
十一、冷饮
  空腹状态下暴饮各种冷冻食品,会刺激胃肠发生挛缩,久之将导致各种酶促化学反应失调,诱发肠胃疾病。

一句话的经典

在网上看到的:

有时候真想去他的房子车子,去他的三险一金,去他的结婚生子,去他的工作应酬,去他的居住证。爱哪儿哪,爱谁谁,走出去,走很远的路,认识很多的人,付出很多的爱,最后,嘎贝儿一声,客死异乡,墓碑上刻着:这家伙去另一个世界继续牛逼了…

论文参考文献自动生成

写论文,参考文献的修改很麻烦,删除一个,添加一个,就需要改一长串数字。怎么办呢。
本人推荐一种简单方法:尾注法
方法如下(以Word2003为例):
1.光标移到要插入参考文献的地方,菜单中“插入”——“引用”-“脚注和尾注”。   
2.对话框中选择“尾注”,编号方式选“自动编号”,所在位置可以选“节的结尾”或“文档结尾”。   
3.如“自动编号”后不是阿拉伯数字,选右下角的“选项”,在编号格式中选中阿拉伯数字。   
4.确定后在该处就插入了一个上标“1”,而光标自动跳到文章最后,前面就是一个上标“1”,这就是输入第一个参考文献的地方。   
5.将文章最后的上标“1”的格式改成正常(记住是改格式,而不是将它删掉重新输入,否则参考文献以后就是移动的位置,这个序号也不会变),再在它后面输入所插入的参考文献(格式按杂志要求来慢慢输,好像没有什么办法简化)。   
6.对着参考文献前面的“1”双击,光标就回到了文章内容中插入参考文献的地方,可以继续写文章了。   
7.在下一个要插入参考文献的地方再次按以上方法插入尾注,就会出现一个“2”(Word已经自动为你排序了),继续输入所要插入的参考文献。
   标号上的方括号如何加呢?很简单:
8用的尾注,在菜单中的“编辑”——“替换”中“查找内容”填写  ^e,替换为[^&]即可:
9用的脚注,在菜单中的“编辑”——“替换”中“查找内容”填写^f,替换为[^&]便可以了  
(这里建议在一篇文章都写完后再将方括号加上会省去很多意外的麻烦)
10.所有文献都引用完后,你会发现在第一篇参考文献前面一条短横线(页面视图里才能看到),如果参考文献跨页了,在跨页的地方还有一条长横线,这些线无法选中,也无法删除。这是尾注的标志,但一般科技论文格式中都不能有这样的线,所以一定要把它们删除。
          还没完,删除横线的方法   
11.切换到普通视图,菜单中“视图”——“脚注”,这时最下方出现了尾注的编辑栏。   
12.在尾注右边的下拉菜单中选择“尾注分隔符”,这时那条短横线出现了,选中它,删除。   
13.再在下拉菜单中选择“尾注延续分隔符”,这是那条长横线出现了,选中它,删除。 
14.切换回到页面视图,参考文献插入已经完成了。
这时,无论文章如何改动,参考文献都会自动地排好序了。如果删除了,后面的参考文献也会自动消失,绝不出错。   参考文献越多,这种方法的优势就越强大。
   别看步骤多,操作一遍,就知道很简单了~

农业、食品相关核心期刊

中文核心期刊又称北大核心期刊,是由北京大学图书馆编辑发布的。
至今中文核心期刊已经发布5版,最新第五版是在2008年发布。
目录(括号内数字为2009年各杂志影响因子)
第一编 哲学、社会学、政治、法律
第二编 经 济
第三编 文化、教育、历史
第四编 自然科学
第五编 医药、卫生
第六编 农业科学
第七编 工业技术
第六编 农业科学
  (137种期刊)
  综合性农业科学类(38)
  安徽农业大学学报、安徽农业科学、东北农业大学学报(0.422)、福建农林大学学报(自然科学版)、甘肃农业大学学报、广东农业科学(0.411)、基因组学与应用生物学、贵州农业科学、河北农业大学学报、河南农业大学学报(0.758)、河南农业科学(0.691)、湖北农业科学、湖南农业大学学报(自然科学版)、华北农学报(1.268)、华南农业大学学报(0.822)、华中农业大学学报(0.946)、吉林农业大学学报、江苏农业科学(0.782)、江苏农业学报(1.156)、江西农业大学学报(0.829)、南京农业大学学报(0.897)、内蒙古农业大学学报(自然科学版)、山东农业大学学报(自然科学版)(0.429)、上海农业学报(0.411)、沈阳农业大学学报、四川农业大学学报(0.326)、西北农林科技大学学报(自然科学版)(0.747)、西北农业学报(0.826)、西南农业学报(0.813)、新疆农业大学学报、新疆农业科学、扬州大学学报(农业与生命科学版)、云南农业大学学报、浙江大学学报(农业与生命科学版)(0.790)、浙江农业学报(0.629)、中国农学通报(0.674)、中国农业大学学报(0.820)、中国农业科学(1.424)
  农业基础科学类(11)
  生态环境学报、水土保持通报、水土保持学报、水土保持研究、土壤、中国土壤与肥料、土壤通报、土壤学报、植物营养与肥料学报、中国生态农业学报、中国水土保持
  农业工程类类(8)
  干旱地区农业研究、灌溉排水学报、节水灌溉、农机化研究、农业工程学报(1.403)、农业机械学报(0.865)、中国农村水利水电、中国农机化
  农学,农作物类(15)
  大豆科学(0.684)、核农学报(1.071)、麦类作物学报、棉花学报、农业生物技术学报(0.698)、玉米科学(1.164)、杂交水稻、植物遗传资源学报、中国棉花、中国水稻科学、中国烟草科学、中国油料作物学报(1.220)、种子、作物学报(1.701)、作物杂志
  植物保护类(9)
  环境昆虫学报、农药、农药学学报、植物保护、植物保护学报、植物病理学报、植物检疫、中国生物防治、中国植保导刊
  园艺类(8)
  北方园艺、果树学报、食用菌学报、园艺学报(1.141)、中国果树、中国南方果树、中国食用菌、中国蔬菜
  林业类(15)
  北京林业大学学报、东北林业大学学报、福建林学院学报、林业科学、林业科学研究、林业实用技术、林业资源管理、南京林业大学学报(自然科学版)、世界林业研究、西北林学院学报、浙江林学院学报、浙江林业科技、中国森林病虫、中南林业科技大学学报、竹子研究汇刊
  畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂类(20)
  蚕业科学、草地学报、草业科学、草业学报、动物医学进展、动物营养学报、黑龙江畜牧兽医、饲料工业、饲料研究、畜牧兽医学报、畜牧与兽医、中国草地学报、中国家禽、中国兽医科学、中国兽医学报、中国兽医杂志、中国饲料、中国畜牧兽医、中国畜牧杂志、中国预防兽医学报
  水产、渔业类(13)
大连水产学院学报、淡水渔业、渔业科学进展、海洋渔业、科学养鱼、上海海洋大学学报、水产科技情报、水产科学、水产学报、水生态学杂志、渔业现代化、中国水产、中国水产科学
第七编 工业技术
 食品工业类(20)
  茶叶科学(1.137)、河南工业大学学报(自然科学版)(1.00)、粮食与饲料工业(0.409)、粮食与油脂(0.415)、粮油加工(0.314)、食品工业(0.428)、食品工业科技(0.647)、食品科技(0.669)、食品科学(0.795)、食品研究与开发(0.849)、食品与发酵工业(0.671)、食品与机械(0.692)、食品与生物技术学报(0.682)、中国粮油学报(0.655)、中国酿造(0.861)、中国乳品工业(0.593)、中国食品添加剂(0.770)、中国食品学报(0.750)、中国调味品(0.472)、中国油脂(0.719)

四条腿的鸡

以前听说过,以为只是谣言。没想到是真的,以后吃肯德基要小心了。

五年的western blot经验总结[转载]

1.抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲,做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单,买进口抗体捉襟见肘,买国产抗体得需要大无畏的勇气,对于我所在的兰州地区的实验者而言,感触尤深。在这五年的western blot实验历程里,我先后用过进口抗体,进口抗体国内分装包装,国产抗体,质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失:abcam品种全,质量过硬,但价高(3400元/100微升),而且说是100微升,但至多能吸出来90微升;Sigma的价最贵;比较有性价比的是CST的抗体,现在好像是2200元/100微升,我前后用过二十几种, 1:1000的稀释比下,还没有失过手,100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验,还有一个优点是通常量比100微升多出来10微升,唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗体质量可以,但是选用Santa的单抗还是有风险,估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少,呵呵,毕竟是穷人(420元/100微升),大概好抗体的比例约为50%,如果能做出来,也存在一个问题,就是抗体大多只能用一次。我曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对(抗体品种,货号等完全一致),在都能做出来的前提下,原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几年,不敢说出来,我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖,也会有所不同。揣测归揣测,假如只为了发论文毕业走人,可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。
国产抗体比较知名的就几家,但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多,而且杂带多,背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化,怎么说呢,应付硕士论文够了。
我也帮别人自制过抗体,再用抗原亲和纯化。效价非常不错,夸张的时候1:10000都能做出条带,唯一的麻烦是兔子太骚(骚臭),不知道这是不是“兔女郎”名号的来由。如果读书非常悠闲,老板又特别想拥有手工作坊的情况下,可以自己伺候折腾兔子来玩玩,刚开始的时候还是蛮有成就感的。只是单凭抗原表达和制备多抗,是不是可以写成论文毕业,估计因校而异了。
2.Western Blot设备
目前最好的垂直槽和转移槽还是Biorad(伯乐),尤其是MINI3好用,MINI4可以一次跑四块胶,但通常用不上,由此造成垂直缓冲液的浪费,而且MINI4用绿色塑料夹住玻璃板来组成内槽,容易漏液,塑料夹应该是有疲劳寿命的,估计日子一长,弹性就会改变,所以如果你们实验室刚买了MINI4,赶紧用,遭殃的肯定是某一级的师弟师妹们。
Biorad的一套系统得两万多,西部能玩得起伯乐的还真不多。好在咱中国人聪明,上海天能的外观和构造和伯乐的MINI3几乎一模一样,而且可以通用,不带电泳仪是5千多一套,挺好用的。唯一的不足是塑料寿命不如伯乐,胶架容易断裂。不过仔细算算,三套天能也就是一套伯乐的价格,值了。北京六一的垂直槽很转移槽很好用,但垂直槽配胶不方便,玻板太厚,散热不好,但能用,六一的电泳仪(电源)还是很好用的。
3. Western Blot实验条件
Western Blot实验条件我基本是按ABCAM公司经典教材做的,按以下的网址下载下来就可以了(http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/WB-beginner.pdf)。具体的试剂配方我是按宝生物试剂册的附录部分配制。丙烯酰胺和甲叉我是从北京华美买的德国biomol原装货,配出来的胶可以提在手里玩,弹性非常好,价格比sigma的便宜许多,1公斤好像是480多人民币,够实验室用好长时间,现在我们实验室做双向电泳都用biomol的胶,很好用。Marker我现在用fermantas 的SM1811,2微升就很清晰了,兰州的代理是上海生工。
要强调的是垂直电泳缓冲液千万不能回收用,具体愿因你只需上网查查SDS-PAGE的原理就知道了。转移电泳缓冲液可以回收再用两次。
转膜我通常是快转两百200毫安/2小时,慢转80毫安/12小时。快转是一定得做冰水浴,就是把槽子泡在冰水混合液里。
封闭我通常用BD的脱脂奶粉,不归,260元500克,也是从北京华美买的。
ECL我用pierce的,500毫升1650元,比国产的还便宜好用。
胶片是柯达的,以前用过乐凯的,不如柯达。
我很少用丽春红或考马斯染膜或染胶,总觉得是脱裤子放屁的事。
4. Western Blot实验关键
Western Blot操作步骤多,每一步的失误都会造成全盘失败,综合而言,抗体仍然是决定成败的关键,如果抗体很滥,就是神仙也没招。其中内参抗体很重要,因为内参抗体的选择关系到全盘实验的考评。Actin,Tubulin,GAPDH我都用过,Actin,Tubulin的缺点是有时候会出现复带,比较稳定的还是GAPDH。如果用心看看cell,nature,science上的文章,大多用GAPDH做内参。进口的,国内分装的,国产的,我都用过。进口的最强的1:10000都能做出条带(Upstate,现在被Minipore招安了),国内分装的也好用,但就是不好回收重复使用,国产的一般只能用一次。我要特别强调的是,实验室里最贵的抗体实际上是内参抗体,因为只要Western Blot开工,每次都得用内参抗体,而一般目的蛋白的抗体也就用几次,重复三次就了事。但内参抗体是不折不扣的耗材,严格意义上将,每跑一次胶,就得杂一次内参,使用频率最高决定了内参是最花钱的抗体。我也自己制备过内参抗体,但好像因为种属同源性太高,背景总是不干净。进口的好,太贵;国产的只能使用一次,年终算账,不比进口的便宜。我自己的体会是多抗制备并不是技术含量极高的事,为什么国内企业高的早不了,低的造不好呢?现在我用的是杭州贤至的GAPDH兔多抗,200微升420元钱,我在蛋白上样量12微升/孔的情况下,按1:2000稀释比,条带非常清晰,没有杂带,是我目前用过的最好的国产抗体,我估计按1:4000照样能做出来,因为按按1:2000稀释做,在暗室里点上ECL后肉眼清楚地看到荧光条带。抗体我在不加叠氮化钠的情况下4度过夜杂交,可回收重复使用5到6次。最早我是2008年在丁香通上看到了杭州贤至(当时名叫杭州松华)发布的广告,我就怂恿实验室主管买了2支,很好用,现在实验室都没有用完 ;2009年我的一个朋友做western,我推荐他又买了1支,做出来的效果确实好,2009年底我到了新的实验室,western的全套我在新实验室重新建立,啥都采购齐了,可就是买不到杭州松华的内参抗体,我上网再也找不到这个公司的网页了,没办法,只好一直噌朋友的内参抗体用。我有个陋习,就是实验中用顺了用稳定了试剂轻易不愿意更换品牌。还好,今年7月份我终于找到了当年的通讯记录,一联系才知道他们改名叫杭州贤至生物科技有限公司了,呵呵,改了个名,害我找了大半年。第三次买到的GAPDH内参抗体,还是好用,1:2000,条带清晰,回收重复用,照样work,截止目前,我的新导师对我采购的一堆试剂还没有不满意的,嘿嘿!草根出生,我也照样有我穷人的劳斯莱斯。
5.关于奶粉,膜的选择和显影定影
奶粉看似简单,其实很重要,如果要凑合,可以到超市买光明的脱脂奶粉。奶粉质量不好,会最终导致显影要么漆黑一片,要么啥都没。fluka的很好,可惜因为疯牛病的原因,现在海关禁止进口美国牛制品。我现在用的bd的,很好很稳定,如果回收使用,500可以用很长时间。细菌达到一定极限后,会导致tbst里的奶粉变质,表现为发绿发臭,一种肉眼可察觉的淡淡的绿,一种鼻子凑过去能嗅出的臭,这时候就得扔了。
nc膜,pvdf膜我都用过,现在我已经固定下来用密理博的0.45微米的pvdf膜。pvdf膜的好处是蛋白载量大,韧性好。唯一的麻烦是事先得用甲醇泡几分钟,目的好像是为了增强膜的正电荷。甲醇泡完后,得在转移缓冲液里泡一两分钟。国内用nc膜的人多一些,主要是因为nc膜有分装的小片,忽悠老板买一张膜就100元钱,老板肯定乐意,若是说膜得花上千元,老板就有可能长时间的思考,然后过些日子再答复你。所以大多数人会采取前一种方式,当然得告诉老板好几次,膜就100元钱。我第一次用到pvdf膜是和好几个实验室合资买了一卷,我出了475元,类似于打的拼车的方式。现在pvdf膜国内大概是1600元到1700元一卷,33厘米*375厘米,够好几个人用好长时间了,膜假货不多,至少我没有见过。我们几个拼车的穷弟兄拿着尺子分赃的时候才发现本地供货商给我们送的货少了80厘米,嘿嘿,穷鬼撵着杀叫鬼,我们花钱容易吗!所以交涉,再交涉,直到他把我们的血汗膜返还才罢休。现在我基本是从北京的欣津科和华美买,大概1700元一卷,完完整整。
0.45微米的pvdf膜我用5%的脱脂奶粉(溶于tbst中)室温封闭1小时,0.22微米的用8%的脱脂奶粉。bsa我很少用,主要是bsa会出现封闭不均匀的情况。我也很少用0.22微米的膜,原因是背景不干净,再者无论是封闭时间还是洗膜时间都得延长。标准教程上推荐20kd以下的分子用0.22微米的膜,我杂过最小的分子是cleaved-caspase3,12ka,按我在一楼的转膜条件,在0.45微米的膜上清清楚楚。我在上海的师弟他们转7ka的分子也用0.45微米的,没出过事。废话一句,我师弟的实验室可是国家重点,那个富呀,让我闭上眼想想吧,那可是屎壳郎掉到了化粪池的感觉。
一抗我一般4度摇床过夜,洗膜3此,每次5分钟。要注意的是,如果一抗里添加了叠氮化钠,务必洗膜5次,每次10分钟,因为叠氮化钠会灭活二抗偶联的辣根过氧化物酶(hrp)活性。二抗我用的是中杉金桥分装的,120元一支,通常1:5000,室温1小时,然后洗膜三次,每次5分钟。
奶粉,一抗,二抗,我都回收,从开始到现在,一直如此。因为我不敢忘记自己贼的出身。我的一抗是国外的一位老师送给实验室的,刚开始的半年我啥都做不出来,以至于导师在平安夜领我到教堂祈祷。上海的师弟知道后,每次裁膜的时候给我一小片一小片日积月累了一些,二抗只拿到了10微升,我怕实验室的人发现,一直是熬夜做western。可最终还是因为我自己嘴不牢靠,导致东窗事发,师弟险些被开除,事情败露的那天,师弟在长途电话的那边哭,我在这边哭,写着写着,我的眼泪又一次的盈眶而出,说不出的辛酸与悲凉,师弟说他承担一切责任,让我装作不知道,那天晚上,我给他的导师写了一封长信,只求能保住师弟。老天保佑,他导师让师弟写检查认错。那以后,我再也没有让师弟为我偷过东西,我不能再为自己的理想让朋友付出代价。虽然现在实验室的老板比较大方,我依然坚持着回收试剂的习惯,我始终不能忘记自己western blot的开始。
一般8.3*4.3厘米的膜,大概要400微升的ecl混合液。加ecl我一般就在灯光下,或者白天把窗帘拉上。加好ecl,覆上保鲜膜后,我才端着暗盒进暗室,暗室里我的暗室红灯始终开着,没有那么可怕。在暗室里,我一般是剪4张同样尺寸的胶片,叠在一起,压在膜上方,暗盒一扣,就干别的事情去了。5个小时或过夜,我再把胶片显影,显影我起初很注意技巧,但现在基本上是在显影液里放10分钟,捞出来放到水盘里涮一涮,然后在定影液里放十分钟。我一般总能找到一张理想的胶片,因为胶片叠加到一起后,层层屏蔽,从而逐渐递减荧光强度,我试过多次,即便是荧光强度最强的内参,也至多能达到最上面的第四层胶片。所以显定影后,肯定有曝光过度的胶片,但也肯定有趋势,背景,强度恰到好处的一张,嘿嘿,傻瓜做法。
傻瓜做法看似呆笨,实则不然。我在很长的一段时间里,都是读秒,或三分钟,或15分钟,或半小时,或1小时取出胶片显影,眼睛紧紧盯着,一看到条带就捞出来定影。如果不理想,再压胶片,再等,再取再投再捞,活脱脱是个“猴埋儿”。西北人传说小猴夭折了,母猴把小猴埋到土里面,一会又挖出来,再埋进去,又挖出来…反复无止。显定影时如果采取猴埋儿式的技巧,是最费胶片,最费时间,最费心力的做法。所以我是傻瓜就用傻瓜的办法。
我用过好几个品牌的国产ecl,和进口的ecl也做过对照。国产的一半是a液b液总共50毫升180元钱,单价3.6元/毫升,一般肉眼可见的荧光强度可持续1个小时,pierce和milipore的可以持续3小时。milipore的麻烦之处在于由a液b液c液三组成分组成,费枪头,费脑子。现在我固定使用pierce的super ecl,1650元500毫升,折算下来是3.3元/毫升。上海吉泰是代理。好像分子克隆上写出了ecl的配方,技术含量并不高,
胶片我用过医院放射科的,乐凯的,柯达的,柯达现在小胶片(小暗盒尺寸)好像是130元/50张,乐凯的是其价格的一半。乐凯的缺点在于胶片容易出现划痕,有莫名奇妙的背景,虽然瑕不掩瑜,但还是让人不爽,再就是感光不如柯达的灵敏。这些我都比对过。如果细心地把二者胶片厚度比比,也可看出差距。我就此请教过甘肃的乐凯总代理,他说根源出在牛身上。
显影液定影液我一直用乐凯的,便宜,量又足,谁用谁说好。进口的从未染指,连想都没想过,呵呵,我内心里还是极其渴望支持国货的,爱之深,恨之切啊!
6.总结
从2005年第一次见到抗体到现在,我已经做western blot实验整整五年了。五年里,太多的磨难,太多的惊喜,太多的感触,太多的代价。现在我做博士后,我指导的学生也能一次就上手,虽然他们也会出错,但我很少责备他们,因为我知道自己的路途也并不顺利,如果过度的责难他们,会让他们失去信心,而且更严重的是会导致他们遮遮掩掩,我从来不怕实验做不出来结果,就怕查不出失败的原因。
我喜欢western blot技术,甚至偏爱或痴迷。最夸张的时候是一天连跑带转了八张膜,实验最不顺利的那两个月我天天就睡在实验室里,有时候三天三夜不睡觉。我不知道自己借了多少钱从丁香园的二手资源版淘过别人用剩的抗体,至今我穿的最贵的裤子也就80元钱,但花1000元买抗体我从来没有觉得破费。好在我的家人和朋友们理解我,支持我,让我能逐步实现自己的愿望。五年里,从器具,试剂,仪器,甚至如何用滤纸,我都形成了自己独有的体系和诀窍,我的一切东东都有品牌,这些品牌组合起来就是穷人的劳斯莱斯。
回想过去,内心仍然会浸没到悲凉与辛酸中。最难受的时候是做p21抗体,整整半年,从丁香园淘了五个品牌的抗体,都做不出来。最后逼着导师买cst的抗体,还是不出,那时候正好是2008年雪灾,抗体在公路上走了半个月,我收到抗体是大年初二,兴奋地上样,转膜,还是没有,当时我感觉自己就好像浸没在冰窖里。宿舍里暖气不好,第二天我起床时,房子里的洗脸水都已结冰,和我的心绪一模一样。好在上海吉泰是一级代理,让我投诉,cst美国总部发回来他们的蛋白阳性对照品,再试,p21出来了,技术支持是个印度人,一眼就看出来我没有用超声波裂解。我们实验室没有这个东东,我怎么就想不到问题就出在这呢!从投诉到解决问题又是两个月。因为western,造成我博士延期一年半,害得师弟差点被开除,这也是我主动和导师关系疏远的开始。
但我还是痴迷western,在我心里,western blot技术本身就是穷人的劳斯莱斯。跑一次胶,我一次可以在两张膜上裁切出13种分子,我想不出还有哪项技术能一次实现如此之多的指标。Western稳定,直观,看着胶片上那粗细浓淡变化的条带,就好像自己置身细胞内部,看着那些分子组合跳舞。我内心里一直非常感激当年馈赠抗体的那位老师,是他让我踏上了信号转导的道路,也是因为western,我一度和他几乎决裂。在做western之前,我看文献几乎只看review,因为我看不懂实验性论文的图片,也正是做western,我才开始真正的踏上科研道路。我逐渐能看懂IP,CO-IP,EMSA,CHIP,我有了更多的梦想与愿望。五年中,我最得意的是陪着western blto的发明人乔治斯塔克(George R. Stark)院士去敦煌玩,老头年过70,动过心脏手术不久,仍然坚持赤脚爬上陡峭的鸣沙山。我们登顶歇气时,老头一声不吭地又从山顶一步步走下去,从半山腰挖什么东西,等他再上来,我们才看清楚,他手里拿着两个游客随地扔弃的矿泉水瓶子。老头一直把那两个国货拎到了山下的垃圾箱里。这是老头给我最深刻的记忆,境当谋高远,一个人的精神境界决定了他专业道路的高远。
从western实验我总结出,实验上根本省不下来钱,一个环节的烂货就会导致全盘失败。对于实验设计而言,也是如此,一个步骤的bug会导致整个实验立题和评估的逻辑混乱。如果要追求性价比,也就是如何发挥穷人的劳斯莱斯的最大收益,那从一开始就要按秋后算账的原则选择试剂,要算总账;如果要让实验顺顺利利,那就得注意每一个环节,步步为营,细节决定成败。到现在,只要抗体work,几乎没有我做不出来的分子,western给了我无穷的自信。

简单易行的止咳偏方

今年春天的天气不稳定,忽冷忽热、反复无常,加之空气质量恶劣,感冒咳嗽的人群越来越多。咳嗽不止的话会引起头痛,严重影响睡眠质量和正常的工作学习。下面为大家介绍几种治疗咳嗽的偏方。
1、川贝冰糖蒸梨,用川贝少许、梨一个、冰糖的量由你自己喜欢甜的程度来定,然后放入蒸锅中将梨蒸到透明状即可食用。
2、选一个头小、水分足的萝卜,洗净放置火中烧至全熟。乘萝卜热气腾腾时剥开表皮,蘸蜂蜜吃下。每次吃2个,每天早晚各1次。连用数日后,咳嗽症状就会痊愈了。
3、红糖30克,鲜姜15克,红枣30克,以水三碗煎至过半,顿服,服后出微汗即愈。驱风散寒,治伤风咳嗽、胃寒刺痛、产后受寒腹泻、恶阴等。
4、燕窝10克,大米100克,冰糖50克,将燕窝放温水中浸软,摘去绒毛污物,再放入开水碗中继续涨发。取上等大米淘洗干净后放入锅内,加清水三大碗,旺火烧开,改用文火熬煮。将发好纯净的燕窝放入锅中与大米同熬约1小时,加入冰糖溶化后即成。滋阴润肺,止咳化痰,治肺虚久咳及咳喘伤阴。
5、黄豆浸泡磨汁,煮沸后加糖饮用。每日清晨空腹饮1碗,健脾宽中,润燥掐水;清肺止咳,化痰。治疳积瘦弱,肺热咳嗽等。
6、生芝麻15克,冰糖10克。芝麻与冰糖共放碗中,开水冲饮。润肺,生津,治夜嗽不止,咳嗽无痰。
7、罗汉果半个,柿饼3个,冰糖30克。加清水两碗半共煮至一碗半,再下冰糖,去渣。1天分3次饮完。清肺热,去痰火,止咳嗽。治小儿百日咳及痰火咳嗽等症。
8、紫皮大蒜1头,蒜去皮,捣成烂泥。每晚睡前洗足后,敷于两足底涌泉穴处(足底必须先涂上凡士林),上面盖一层纱布,足心有较强刺激感时可揭去。如足底无不适感,可连敷3-5次。解毒,镇咳,用治风寒咳嗽,燥咳以及小儿百日咳。
以上偏方的食材容易得到,做法简易,可以起到良好的止咳效果。不过,食疗只是治疗的一部分,与人的体质有极大关系。倘若食疗久日不见效,还需服用止咳药,比如益佰制药的克咳等。切勿拖延时间,企图“扛”过去,如果咳嗽不及时治疗,极有可能发展为慢性咽炎等慢性疾病。

百度网盘邀请码

P-values, False Discovery Rate (FDR) and q-values

What are p-values?

The object of differential 2D expression analysis is to find those spots which show expression difference between groups, thereby signifying that they may be involved in some biological process of interest to the researcher. Due to chance, there will always be some difference in expression between groups. However, it is the size of this difference in comparison to the variance (i.e. the range over which expression values fall) that will tell us if this expression difference is significant or not. Thus, if the difference is large but the variance is also large, then the difference may not be significant. On the other hand, a small difference coupled with a very small variance could be significant. We use the one way Anova test (equivalent t-test for two groups) to formalise this calculation. The tests return a p-value that takes into account the mean difference and the variance and also the sample size. The p-value is a measure of how likely you are to get this spot data if no real difference existed. Therefore, a small p-value indicates that there is a small chance of getting this data if no real difference existed and therefore you decide that the difference in group expression data is significant. By small we usually mean 0.05.

 

What are q-values, and why are they important?

False positives

A positive is a significant result, i.e. the p-value is less than your cut off value, normally 0.05. A false positive is when you get a significant difference when, in reality, none exists. As I mentioned above, the p-value is the chance that this data could occur given no difference actually exists. So, choosing a cut off of 0.05 means there is a 5% chance that we make the wrong decision.

The multiple testing problem

When we set a p-value threshold of, for example, 0.05, we are saying that there is a 5% chance that the result is a false positive. In other words, although we have found a statistically significant result, in reality, there is no difference in the group means. While 5% is acceptable for one test, if we do lots of tests on the data, then this 5% can result in a large number of false positives. For example, if there are 200 spots on a gel and we apply an ANOVA or t-test to each, then we would expect to get 10 false positives by chance alone. This is known as the multiple testing problem.

Multiple testing and the False Discovery Rate

While there are a number of approaches to overcoming the problems due to multiple testing, they all attempt to assign an adjusted p-value to each test, or similarly, reduce the p-value threshold. Many traditional techniques such as the Bonferroni correction are too conservative in the sense that while they reduce the number of false positives, they also reduce the number of true discoveries. The False Discovery Rate approach is a more recent development. This approach also determines adjusted p-values for each test. However, it controls the number of false discoveries in those tests that result in a discovery (i.e. a significant result). Because of this, it is less conservative that the Bonferroni approach and has greater ability (i.e. power) to find truly significant results.

Another way to look at the difference is that a p-value of 0.05 implies that 5% of all tests will result in false positives. An FDR adjusted p-value (or q-value) of 0.05 implies that 5% of significant tests will result in false positives. The latter is clearly a far smaller quantity.

q-values

q-values are the name given to the adjusted p-values found using an optimised FDR approach. The FDR approach is optimised by using characteristics of the p-value distribution to produce a list of q-values. In what follows I will tie up some ideas and hopefully this will help clarify some of the ideas about p and q values.

It is usual to test many hundreds or thousands of spot variables in a proteomics experiment. Each of these tests will produce a p-value. The p-values take on a value between 0 and 1 and we can create a histogram to get an idea of how the p-values are distributed between 0 and 1. Some typical p-value distributions are shown below. On the x-axis we have histogram bars representing p-values. Each has a width of 0.05 and so in the first bar (red or green) we have those p-values that are between 0 and 0.05. Similarly, the last bar represents those p-values between 0.95 and 1.0, and so on. The height of each bar gives an indication of how many values are in the bar. This is called a density distribution because the area of all the bars always adds up to 1. Although the two distributions appear quite different, you will notice that they flatten off towards the right of the histogram. The red (or green) bar represents the significant values, if you set a p-value threshold of 0.05.

pvaluegraph

If there are no significant changes in the experiment, you will expect to see a distribution more like that on the left above while an experiment with significant changes will look more like that on the right. So, even if there are no significant changes in the experiment, we still expect, by chance, to get p-values < 0.05. These are false positives, and shown in red. Even in an experiment with significant changes (in green), we are still unsure if a p-value < 0.05 represents a true discovery or a false positive. Now, the q-value approach tries to find the height where the p-value distribution flattens out and incorporates this height value into the calculation of FDR adjusted p-values. We can see this in the histogram below. This approach helps to establish just how many of the significant values are actually false positives (the red portion of the green bar).

pvaluegraph2

Now, the q-values are simply a set of values that will lie between 0 and 1. Also, if you order the p-values used to calculate the q-values, then the q-values will also be ordered. This can be seen in the following screen shot from Progenesis SameSpots. Notice that q-values can be repeated.

stats-table

To interpret the q-values, you need to look at the ordered list of q-values. There are 839 spots in this experiment. If we take spot 52 as an example, we see that it has a p-value of 0.01 and a q-value of 0.0141. Recall that a p-value of 0.01 implies a 1% chance of false positives, and so with 839 spots, we expect between 8 or 9 false positives, on average, i.e. 839*0.01 = 8.39. In this experiment, there are 52 spots with a value of 0.01 or less, and so 8 or 9 of these will be false positives. On the other hand, the q-value is a little greater at 0.0141, which means we should expect 1.41% of all the spots with q-value less than this to be false positives. This is a much better situation. We know that 52 spots have a q-value less than 0.0141 and so we should expect 52*0.0141 = 0.7332 false positives, i.e. less than one false positive. Just to reiterate, false positives according to p-values take all 839 values into account when determining how many false positives we should expect to see while q-values take into account only those tests with q-values less the threshold we choose. Of course, it is not always the case that q-values will result in less false positives, but what we can say is that they give a far more accurate indication of the level of false positives for a given cut-off value.

When doing lots of tests, as in a proteomics experiment, it is more intuitive to interpret p and q values by looking at the entire list of values in this way rather that looking at each one independently. In this way, a threshold of 0.05 has meaning across the entire experiment. When deciding on a cut-off or threshold value, you should do this from the point of view of how many false positives will this result in, rather than just randomly picking a p- or q-value of 0.05 and saying that everything with a value less than this is significant.

Original Link

如果泰坦尼克号最后没有撞冰山…

 

titanic

[转载自iPc.me]

如果泰坦尼克号最后没有撞冰山,那么结局会是怎样?

Rose 是否会与Jack厮守终老。抑或如某位豆友所说:“本该是一次转头就忘的约炮,却因一次海难成为一生的怀念!”也许还有其他的结局……

night_wip1

若是在港片,结局会是这样:Rose本想选择和Jack在一起,但被Karl威胁,如果不回到他身边,他将会利用家族的势力,找人杀了Jack。Rose为保护Jack,狠心和Jack分手,忍辱回到Karl身边,每天过着以泪洗面的生活。却不想卑鄙的Karl仍不肯放过Jack,派杀手追杀他。Jack摔下悬崖,被神秘人所救,获得神秘人传授一身本事。每天苦练枪法,三年后武艺大成,出山报仇。夕阳下,白鸽飞起,Jack身着黑色风衣,手执双枪,一番扫射,将Karl及其爪牙打成筛子,终于报仇雪恨。Rose觉得自己对不起Jack,于是想独自走。Jack将 Rose紧紧拥入怀里,深情的说道;”发生这种事,大家都不想的。命运的事呢,是不能强求的,所谓吉人自有天相。呐,做人呢,最要紧的就是开心。饿不饿?我下面给你吃!”

若是在韩剧,结局会是这样:Rose毅然甩了高帅富未婚夫Karl,为爱选择穷困潦倒的Jack。Jack从此浪子回头,不再吃喝嫖赌,找了一份在酒店做侍应生的工作,业余时间还坚持练画。Rose 与家庭决裂,靠着卖以前的首饰,开了一家小花店卖花,两个人每天吃着泡菜,过着贫穷但却幸福的生活。就在Jack的画慢慢有了一定的名气,生活慢慢好转起来时,Rose却得了白血病。临死前,Rose躺在Jack怀里说道:“偶吧,你一定要幸福哦!我会在天堂守护着你。Jack,I’m flying! 说完便断了气。从此Jack终生不娶,每天活在回忆里,孤独终老。

若是在印度片,结局会是这样:Rose为选择帅气迷人的Jack,还是高帅富的Karl苦恼不已,最后还是在两人之间摇摆不定。于是Jack和Karl为爱决斗,在船上打起来了,打着打着,音乐突然响起,三人跳起舞,马上周围出现一大帮围观群众,大家一起在船上跳起了欢快的广场舞。

若是在台剧,结局会是这样:Rose和Jack在一起,几个月才发现Jack原来是国内某大集团的富二代,因为以前被女人骗过钱,受过情伤,认为一切接近他的女人都是为了他的钱。为了找寻真爱才装成一副穷逼样接近Rose。Rose觉得自己被Jack欺骗了感情,自尊心受到了极大的伤害。留下一封信后,毅然离开Jack。出门时神情恍惚,不小心出了车祸,从此失忆。被前未婚夫Karl所救后,误以为Karl才是真爱。Jack费劲千辛万苦找到Rose,Rose却不认得眼前的爱人。大结局时,Rose由于意外撞到头部,恢复记忆,终于认出Jack,两人终在一起。

若是在内地剧,结局会是这样:Jack和Rose结婚以后,依然死性不改,用着Rose在外面打工赚来的辛苦钱吃喝嫖赌,喝醉了还打Rose。一年后,Rose终于无法忍受这样的生活,离开了Jack,回到了高帅富Karl身边。Jack终于悔悟过来,但一切已无可挽回。于是Jack痛改前非,发奋图强,每天努力画画。二十年后,名利双收的Jack已是著名画家,但他仍对Rose念念不忘,但找了二十年,一直没找到Rose。在酒吧邂逅一个国外归来的少女,这个少女不仅美貌非凡,而且酷似Rose。气质非凡的大叔Jack对少女有着致命的诱惑力,而他内心也把少女当成了Rose的替代品。酒醉之后,两人干柴烈火,滚起了床单。翌日,少女父母从国外归来,Jack和少女前去别墅见少女父母。晴天霹雳,Jack发现开门的竟是Rose,从Rose的口中,Jack得到恐怖答案,当年Rose是怀着身孕离开Jack的,少女不但是Rose之女,更是Jack之女……

若是在英剧,结局会是这样:Jack和Rose在一起之后,过了一段幸福的生活,不过好景不长,Jack发现 Rose对他越来越冷淡,回家的时间也越来越晚,有时甚至整晚都不回家。Jack忍不住了,有天跟踪Rose,发现Rose上了一辆法拉利,并与车中帅哥激情热吻。Jack心如刀割,整日借酒浇愁。某晚,Jack在酒吧偶遇Rose以前的高帅富未婚夫Karl,或因两人都曾被同一女人伤害,所以相谈甚欢,喝了很多酒。翌日Jack酒醉醒来,发现自己赤裸躺在酒店床上,身边睡的竟是Karl。原来Karl发现自己竟在不经意之间爱上了情敌Jack,对其念念不忘。于是找帅哥勾引Rose出轨,用尽心思,只为得到Jack。俊美不凡的Jack突然发现自己原来也对帅气多金的Karl芳心暗许,于是,有情人终成基友。

若是在德剧,结局会是这样:罗丝、杰克还有卡尔一起下了船,卡尔问罗丝,要跟谁一起走?罗丝翻了个白眼说:“噢。”然后卡尔再问罗丝,要跟谁一起走?罗丝又翻了个白眼说:“噢。”整个戏就在问答的无限循环中结束。

若是在日剧,结局会是这样:三人演着演着就滚到了一起,啪啪啪~啪啪啪~啪啪啪~雅蠛蝶~