北大一首暴强的失恋诗

怒
何故   
昨日暮   
偶遇见她   
把纤纤玉手   
交那衰人牵住   
盈盈笑语左右顾
   
神采飞扬凌波微步   
美眸中一片深情倾注   
似前年与我同在湖畔路   
也这般附耳交顾低语倾诉   
如今见我头也不点形同陌路   
我发现自己旧情难忘六神无主   
两眼痴呆双脚生根心内如被汤煮   
像我这么优秀的男子她总嫌我老土   
那土鳖相貌恶心行止猥琐她爱他粗鲁   
女孩子搞不清她想什么我越琢磨越胡涂   
明知道她与自己不合适想忘记她另起灶炉   
到头来都只能是剪不断理还乱最终于事无补   
兄弟我长这么大从来没怕过谁却栽给了这个主   
看来是上辈子欠她很多钱早知如此就不该和她堵   
碰上她算我倒霉下次说什么也得找个温柔姑娘相处   
总算明白这世上漂亮不能当饭吃往往还让你难堪重负   
从现在起踏踏实实勤勤恳恳谦虚谨慎待人有礼爱护公物   
切记过马路左右看要走人行斑马线要想富少生孩子多种树   
化悲痛为力量一边努力学习一边时刻准备着开发祖国大西部   
大丈夫何患无妻没有了你虽然孤独但也使我从此不再一叶障目   
这也使我好好反思为什么会失败总结经验教训继续探索革命道路   
我会遇上好姑娘没命地追她想她爱她决不放过她不管她属虎还属兔  

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这个有志青年是个好同志失恋了不失魂落魄自暴自弃颇有男儿气度
他虽然遭遇了现代女陈世美被无情抛弃但没有怪命也不埋怨愤怒  
反而擦亮眼睛激发斗志将其丑恶行径卑鄙嘴脸进行了深刻揭露   
再次论证了阶级斗争将会在一定范围内长期存在的精辟论述   
展望了初级阶段革命尚未成功同志仍需努力这条基本道路   
尤其难能可贵的是该同志认真反省自己并触动灵魂深处   
认识到过去在湖畔漫步是小资产阶级情调的严重错误   
险些为漂亮的外表所迷惑中了糖衣炮弹的惯用招数   
理论联系实际痛定思痛如梦方醒才知道差点迷途   
漂亮不能当饭吃漂亮不是本质不是革命的全部   
语言虽然通俗但体现了有志青年的朴实感悟   
批评与自我批评言辞感人真可谓发自肺腑   
并萌发修身齐家治国平天下的远大抱负   
体现了由此及彼由表及里的思想反复   
像他这么优秀的青年怎么能说他土   
自然是徒具外表的女人有眼无珠   
天涯何处无芳草佳丽不问出处   
好马不吃回头草旧情勿枉顾   
兔子不吃窝边草以为三窟   
百步之内必有芳草无数   
也许有天她变成弃妇   
才会想起你的好处   
再回来找你倾诉   
一切已经太晚   
你也有今天   
一屑不顾   
不理她   
扮帅   
酷

博士生的女朋友有话要说

博士生的女朋友有话要说！！！
     在认识我男友之前，我对博士生的敬仰之情如滔滔江水，我原来觉得他们是家乡的骄傲，国家的精英，好像是山上的神仙，潜心科研，逍遥自如，与我们这些凡人大大不同。但是，我现在发现，在读的博士生竟然是个特别的“弱势群体”。
     前些天我听我男友说，他隔壁寝室师兄跟女朋友分手了，师兄女友的父母不同意把女儿嫁给没有房子的他。我男友的室友也跟相恋2，3年的女友分手了，原因还是房子，钱！他们已经要准备结婚了，他女友在老家工作，结婚后打算过来上海，她要求在上海买房，他现在的经济状况买不了，于是吵吵吵~~~吵到分,分了~~~分了，就这么分了，就因为房子，钱！房子！听说那位博士兄弟天天喝酒，夜里还忍不住流泪。
     我是女生，我能理解女生和女生家长。家长都希望自己女儿嫁个条件好些的，女儿就可以少吃点苦少受点累。我也曾经因为我男友现在经济条件不好，狠狠的大哭过一场：为什么别的女孩子嫁人了，有浪漫的婚礼，有钻戒，有房子有车子。而我们，要想办婚礼都得去四方借钱？更别想啥房子车子了，为什么？我觉得委屈，我不比别的女生差，为什么我的生活是这样？！！
     我男友心里也很难受，哑巴吃黄连，有苦说不出。十年寒窗，他从农村考上交大，读研，读博，在家乡他是学弟学妹的榜样，被当作天才一般，是家乡的骄傲。在学校，他专心科研，认真刻苦取得的成绩也得到了许多赞许。可他却止不住我委屈的眼泪，物质上，他现在给不了什么,他也不明白为什么觉得自己挺优秀，日子却过成这样。学校的那些补助，只能基本保证自己温饱。今年我的生日礼物是条玫瑰金项链，我又开心又心疼，他为了给我礼物，省吃俭用存了好久。
      他没有钱，但他有错么？？！没有！！他每天都很努力，很努力的学习工作。我有错么？！我非常能理解他的处境他的难处，可是，我就是想哭，我就是止不住眼泪。在这个物质的社会，我承认我是有些心浮气躁，我也想像神仙一样淡薄名利，可有的时候，真的，好难过。为什么？告诉我为什么这样……
     记得我问我男友当时为什么报考交大机械，他说高中时特别喜欢军事，特别爱看军事杂志上的战斗机，军舰啥的，他梦想成为中国造航母的专家。后来问他为什么读博士，他说希望以后能过上好些的日子，不过早知道现在这样，不如当时本科就出来工作了，像本科那些同学一样，都已经过上好日子了。
      我很想告诉学弟学妹们，特别是学弟们：如果家里不是很富裕，请你考虑清楚再决定是否读博士搞科研，不管你有多适合科研，不管你多有热情为科学献身。因为，来自生活和情感的压力，很有肯能把你热情的火焰浇灭。
      博士，是很难读的，很多博士生不到30岁就有白发，头发也随着思考的增多而减少；而且，基本至少要读到而立之年，你那点补助只够自己的温饱，父母在供你上了大学，研究生后还不能歇一歇，他们想着你还没工作，他们要帮你存钱娶媳妇（我男友的父母近六十了，种了好多菜卖，你能想到市场上有的蔬菜他们都种了，不管天多热，他们都在田里忙。为了占 个好摊位，每天早上2点起来去市区卖菜，怎么劝他们别去累了苦都不听，就是因为他还没工作）。
      还有件事让你难过的，就是你同学的小孩都能去打酱油了，你超过晚婚年龄好几年了还没有女朋友；如果你有女朋友，情况更糟糕：本来压力只是来自觉得对不住父母，现在女朋友那又来了一层压力。即使她非常通情达理，温柔体贴，善良朴实，一点都不吵不闹不抱怨，你也会有压力。一个有责任心的男人，都会想尽最大的力让自己的爱人过上更好的生活，而你现在基本上不能给她什么，甚至，工资还没她的一半。
      最惨的是，你在承受着巨大压力艰难前行的时候，被伤了一刀：她离开了你。大家都觉得博士毕业后有个光明的前途，是的，毕业后你被认为是香馍馍，说不定很容易娶个大美女。但是，这几年的痛苦有多少人能熬过去？感情上的伤，被刀捅过的心，一辈子都有疤的。
      我大概知道为什么几乎每年著名高校都有博士自杀的消息了，肯定不是因为哪个算法很难，推不出来，多是思想感情进了死胡同，被各方的郁闷压得受不了，解不开。他们有着高智商，是某一科学领域的精英 ，但是情感上他们太需要支持，经不起太多的打击。其实我觉得他们是个特殊的“弱势群体”。
     我们都知道需求金子塔：生理、安全、社交、尊重和自我实现。我发觉生理和社交需求，我们的辛苦的博士生们却比同一年龄的普通人有的少，少很多 。希望教育部的领导们在花时间想把那44个汉字写更好看的同时，也花点时间关心一下我们花了20年培养出来的博士们。他们不指望读博士生在生活上过的有多好，他们多是习惯了清贫的人，但希望生活不要给他们太多的压力让他们分太多的心。希望不要太经常捉襟见肘，在过年过节的时候能给父母买点补品买两件衣服，在同学结婚送红包时不用老想着接下来几个月该如何节衣缩食……让他们全身心的投入到科研中去，或许，我们还有拿诺贝尔奖的可能。

     最后，我还有些话对姐妹们说：现在社会都流行着“没房没车谁嫁你？”，其实，我们没有必要随大流。我曾经想过，在老了之后，最需要的是什么？当然不是名车——是一双紧握着你的手，陪你一起散步唠嗑的人。在要离开这个世界的时候，最留恋的是什么？当然不会是豪宅——是你爱的人！
     如果你遇到一个人，他爱你，你爱他，你们性格适合 ，你知道不会变心，那么——嫁给他！
     不管他有几间房，存了多少钱，家里几亩地，地里几头牛~~~
     相信我，你们会幸福一辈子的！

     愿人人都有一颗宁静的心，愿明天更好……

八十年代生人毕业十大尴尬

     总被人称还是个孩子，掐指一算，竟也26岁了，可怕可怕，更为苦恼的是，八十年代生人遇到了他们人生中的诸多尴尬，不吐不快！　　

    

     尴尬一：大学文凭算哪根葱
　　辛辛苦苦小学六年勤勤恳恳初中三年废寝忘食高中三年，眼看要走进考场却赶上国家扩招，任他猫猫狗狗也都能混个大学文凭，现在大学文凭算什么葱啊！相关阅读：女人漂亮就等于拥有大学文凭？坦白：正好混了个
　　

     尴尬二：刚毕业就失业？
　　稀里糊涂大学混了四年，使尽浑身解数拿到英语四级、计算机三级证，毕业证、学位证二证在手却怎么也找不到如意的工作，有的连工作都找不到——刚毕业就失业。坦白：混了四年拿了几个证，现在的工作的感觉就是被骗了，谁叫我们都是“第一次”啊，现在的大学生值几个钱啊。

　　尴尬三：干的还没民工开心
　　千辛万苦进了外商独资企业当白领，还是世界五百强，才发现原来中国现在遍地是外企，五百强有499家都在中国有分号。干白领的活承受巨大压力天天加班挣得比民工又多不了多少，稍微发点牢骚就有老外拍桌子：你他妈什么玩意儿，上午把你fire下午我就能找一个！故事：女外企经理的青涩生活
　　坦白：幸运没进掉外企

　　尴尬四：房子是心头之痛！
　　福利分房早已成为昨日黄花，住房公积金少得可怜，又赶上无耻之徒畜牲一样遍地炒房，辛辛苦苦工作了一年，才发现如果不吃不喝睡大街衣麻袋一年攒的钱才能买四五平米住房，贷款住进新房一点都开心不起来——要换贰拾年的贷款啊！生活：25大城市哪里买房好？
　　坦白：没敢想买房，只想把房租交上

　　尴尬五：哪里有“真”可言？
　　小时候教育要做个诚实的孩子，中学大学又普及诚信教育，工作后却不得不抽假烟、喝假酒、说假话，上了拿假文凭人的当，在假发票上签了字，最糟心的是——花钱叫了个小姐，一摸身上全是假的。
　　坦白：虽然假话到是不说，但假酒喝了不少，抽烟那叫人在江湖身不由己；倒是没叫过小姐，听到这两个字都起鸡皮疙瘩。

　　尴尬六：发现“所学无用”
　　他们说计划经济的教育已经跟不上时代，他们说要普及素质教育，结果我们什么都得学，什么都刚摸到皮毛却连皮毛都不知道。一旦参加工作发现原来在学校里什么都没有学到，得花大把大把的钱去上这个班去考那个证。班上完了，证也考到了，发现自己还是一个二百五。
　　坦白：越来越觉得自己真是一个二百五

　　尴尬七：“网”上人生的迷茫
　　电子信息产业高速发展，网上信息如潮如涌，不论是垃圾还是精华都让人疲惫不堪，没手机没电脑人家会觉得你生于六十年代，有人天天打游戏有人天天上网也有人天天在网上钓鱼——美人鱼出现的几率小于万分之一。网络，好大一张暧昧的温床
　　坦白：出现美人鱼，是人家的

　　尴尬八：对社会心灰意冷
　　从小学完雷锋学赖宁，接着在学李素丽、孔繁森，之后还有济南交警还有抗洪英雄还有在异国他乡被炸死的记者还有……说一套做一套，表面文章做足了接着自私自利。
　　坦白：看透了社会，就是蒙人玩，打死也不做公务员

　　尴尬九：一事无成，一钱未赚，一权未谋？
　　闯荡社会若干年发现一事无成，一钱未赚，一权未谋，必不得已重新拾起书本泡在这个考前冲刺那个精华笔记那个制胜宝典那个某某密题中，希望能够再去学校混个更高一点的文凭出来好混日子。
　　坦白：回想起来在学校的日子叫爽啊，可惜没有珍惜，多希望上天再给一次机会，目前有考研的打算。

　　尴尬十：谁把我们放在了眼里？
　　美好的生活属于谁呢？二十年前，“属于我，属于你，属于八十年代的新一辈“，十五年前“太阳是我们的，太阳是我们的，月亮……”，十年前“让我们期待明天会更好！”，八年前“不经历风雨，则么能见彩虹，没有人能随随便便成功”，现在“我闭上眼睛就成天黑”。
　　坦白：1990S初生牛犊不怕虎，谁都没把八十年出生的人放在眼里。

美国人嘴边最COOL的口语

thousand times no! 绝对办不到！
Don’t mention it. 没关系，别客气。
Who knows! 天晓得！
It is not a big deal! 没什么了不起！
How come… 怎么回事，怎么搞的。
Easy does it. 慢慢来。
Don’t push me. 别逼我。
Come on! 快点，振作起来！
Have a good of it.玩的很高兴。
It is urgent. 有急事。
What is the fuss？吵什么？
Still up？还没睡呀？
It doesn’t make any differences. 没关系。
Don’t let me down. 别让我失望。
God works. 上帝的安排。
Don’t take ill of me. 别生我气。
Hope so. 希望如此。
Go down to business. 言归正传。
None of my business. 不关我事。
It doesn’t work. 不管用。
I’m not going. 我不去了。
Does it serve your purpose？
对你有用吗？
I don’t care. 我不在乎。
Not so bad. 不错。
No way! 不可能！
Don’t flatter me. 过奖了。
Your are welcome. 你太客气了。
It is a long story. 一言难尽。
Between us. 你知，我知。
Big mouth! 多嘴驴！
Sure thin! 當然！
I”m going to go. 我這就去。
Never mind. 不要緊。
Can－do. 能人。
Close－up. 特寫鏡頭。
Drop it! 停止！
Bottle it! 閉嘴！
Don”t play possum! 別裝蒜！
There is nobody by that name working here.這裡沒有這個人。
He neither drinks nor smokes. 他既不喝酒也不抽煙。
Dead end. 死胡同。
Break the rules ?反規則。
How big of you! 你真棒！
Poor thing! 真可憐！
Nuts! 呸；胡說；混蛋
Make it up! 不记前嫌！
Watch you mouth. 注意言辞。
Any urgent thing？有急事吗？
How about eating out？外面吃饭怎样？
Don’t over do it. 别太过分了。
Can you dig it？你搞明白了吗？
I’m afraid I can’t. 我恐怕不能。
You want a bet？你想打赌吗？
What if I go for you？我替你去怎么样？
Who wants？谁稀罕？
December heartbeat. 黄昏恋。
Follow my nose. 凭直觉做某事。
Cheap skate! 小气鬼！
Go to hell！ **吧！
Come seat here. 来这边坐。
Good luck! 祝你好运！
Gild the lily. 画蛇添足。
Make it. 达到目的，获得成功。
I’ll be seeing you. 再见。
He has an ax to grind. 他另有企图。
I wonder if you can give me a lift？能让我搭一程吗？
It is raining. 要下雨了。
Can I have this. 可以给我这个吗？
I might hear a pin drop. 非常寂静。
Why are you so sure？怎么这样肯定？
Is that so？是这样吗？
Don’t get loaded. 别喝醉了。
Stay away from him. 别*近他。
Don’t get high hat. 别摆架子。
Right over there. 就在那里。
Doggy bag. 打包袋。
That rings a bell. 听起来耳熟。
Sleeping on both ears. 睡的香。
Play hooky. 旷工、旷课。

一个高人的实验注意事项——超级有用

实验中的每个环节都很重要
忽略任何一个都可能导致实验的失败
每个人在实验中都有自己的一些好的细小的习惯

01.例如tip头吸完后马上从移液器上取下来，以免忙乱的时候又以同一tip汲取另一种试剂

02.用完量桶或者烧杯后，及时清洗，并放入烘箱。
03.不管大小实验，做完后都要认真做记录。
04.一个枪头如果可以连续吸两次的话，也不能吸，主要是第二次吸时不准，同时也不能完全打出来。
05.做完实验擦干桌子，一切东西归位，有些东西可以回收的就回收，很多实验室的枪头是回收的
06.实验前认真设计，作实验时不胡思乱想，叽叽喳喳，做完后在海阔天空，认真分析试验数据
07.做之前认真设计,做时就不要老是想着结果,平心静气,注意细节，认真记录，因为失败是常事，不要回过头不知道该从哪里找原因。
08.每次的实验结束，要及时做好记录，不要等。好记性不如烂笔头，这虽然是俗语，但是不要放弃笔的重要性！
09.加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均
10.做完实验，清理实验台，以便下次能够更快、更好，更方便的继续工作！药品归位，仪器归位！
11.做实验一定要有计划,最好在有部分实验数据出来时,就着手写文章,这个不是为了出文章,而是在写文章的时候,可以清晰自己的思路,知道后面该先做什么,该重点做什么.不然有时候辛苦半死,数据太分散,不能说明问题.
12.不轻易用别人的东西，用时先打招呼，记录要详细，配液体时要记录试剂的批号等?
13.所有的东西都要即时标记好，日期，药品名称，浓度，等
14.移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性。
15.不用酶标枪时不要一直拿在手里，不可以倒过来（特别是里面还有液体的时候）
16.不要一直说话、聊天~~
17.笔记要全~要多全有多全~
18.还有一点很关键，笔记要放好，最近我的笔记掉了~哭死
19.最后，做完实验要洗手~
20.离开实验室前或进入实验室前注意水，电是否安全
21.试验之前看资料的时候，最好规类存放，看过后记下重点内容，并将出处标明，以免日后找不到
22.一定要记着关水浴箱，切记切记。

实验记录要记录这些内容：
1、先写实验步骤再做实验，实验的间隙注意写下实验现象的描述，实验后注意实验数据的整理和分析。
2、试剂最好自己配，公用的试剂第一次用时要做质检，并注明时间和谁配的，实验室中每个人都应该有个单字母缩写的名字。
3、认真做好实验前的准备工作，包括试剂、仪器的准备，实验方法的确定，请教一下做过类似实验的人。实验不单单是做出来的，还要有你的思想在里面，否则和一个操作工有什么区别。
4、EP管上一定要做好标记，写上日期，同时记录本上应该有详细的情况。重要的东西可以再加贴一张标签纸，在冰箱中反复冻融会使字迹模糊，可以再用透明胶带纸贴在字外面。

多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了!希望有帮助
     实验前多想想，不要着急动手，在脑子里把全部的实验过程过一遍，尽量做到一次成功。要学习美国人的精神，尽一切努力做好这一次，不要想着这一次作不出来再做一遍，这样永远都作不好实验。

     注意他人的安全，注意自己的安全，注意实验室的安全！
     作实验的时候不要想其他的事情，想其他事情的时候不要作实验！
    大胆尝试，不要怕做不出来。尝试越多，获得原创性发现的可能越大。

作好预实验，先动脑后动手，作完以后要思考。
实验过程中不要与人海聊，以免污染。
用过的仪器等恢复原样，清洁实验台面。

大家说的都是切身体会，相信对newcomer和其他人都有启发。
记得一个NOBEL获得者说过：在实验室工作时什么都不要想，要专心于手头的工作；作完实验，要海阔天空地联想， 特别是实验的新思路和方法。
我认为要有风险意思，有些实验你要费很长时间的，或要花很多钱的以及结果对你接下来的实验很重要的，最好做一份详尽的试验流程图贴在试验台前，需要特别加以注意的地方要特别标注，可以随时参照。

你一定要仔细准备，争取一步到位，这样不用又费力又费钱！实验前最好做一个flow chat！
做实验前,设计好时间安排,可以在有限的时间内做更多事.利用起离心和电泳的空闲时间
补上记录和作一些整理工作

最好不让干燥箱过夜
取用有盖子的器皿时，不能抓盖子，以免脱落!
湿手不可握光滑玻璃器皿，以免滑脱！

我觉得做实验要清楚自己所做实验的原理，这样通过仔细记录每步实验的操作，才能找出实验失败的原因。 不用别人的试剂。
所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因。
不要太迷信kit，有时候土办法更有用。

首先要靠自己，但也要多交流
当天事要当天毕
认真记录
团结周围的实验同事，因为成也他们，败也他们，这是顺利完成的关键，毕竟良好的人际关系和环境是舒服的

1, 事前充分设计
2 事时认真观察，及时记录，无论好坏
3 事后及时处理数据。
4 遵守实验公约，东西及时归原位。
5 及时处理垃圾整理物件等等

正式实验前的预备实验很重要。这样可以把一些你原来根本就没想到的漏洞补上。还有就是动手前尽量完备自己的protocols。
作实验时认真思考，对每一个步骤都提前想想。实验完毕后，收拾好自己的桌面，在用枪时务必注意轻轻吸液，以免吸到枪里面，很容易就会将枪腐蚀了，而且容易污染以后的实验。
一次最好只跟改一个实验条件，不然就搞不清楚到底是哪个条件改变影响了实验结果我觉得做实验最重要的是耐心和细致.

还有一点就是要做到不耻下问!

实验前充分思考可能出现的问题和结果，试验过程中则不能被自己预计的结论左右。试验结束后尽快整理试验数据，该统计分析的就分析，该作图的作图。同时，查阅文献，对自己的试验结果能够准确解释

注意19个细节，让老板没法不用你！！！

注意19个细节，让老板没法不用你！！！

    

 

 

     1.工作时间不要与同事喋喋不休，这样做只能造成两个影响，一是那个喋喋不休的人觉得你也很清闲，二是别的人觉得你俩都很清闲。
　　2.不要在老板不在的时间偷懒，因为你手头被打了折扣的工作绩效迟早会将你的所作所为暴露无遗。
　　3.不要将公司的财物带回家，哪怕是一只废弃的椅子或鼠标垫。
　　4.不做夸张的装扮，工作场合远离半尺厚的松糕鞋与有孔的牛仔裤，否则你的这种装扮让别人无法集中精神，也制造出与业务极不相称的气氛。
　　5.不要仅为赚取更多的钱，就为公司的竞争对手做兼职。更不要为了私利，就将公司的机密外泄，这是一种职场上的不忠，员工之大忌。
　　6.不要淹没在电子邮件中，除非你正在等一个很重要的东西，否则没有必要立即或时时刻刻阅读邮件。预留一段时间，一次性做出处理。
　　7.不要每日都是一张苦瓜脸，要试着从工作中找寻乐趣，从你的职业中找出令你感兴趣的工作方式并尝试多做一点。试着多一点热忱，可能你就只欠这么一点点。
　　8.不要推脱一些你认为冗长及不重要的工作，要知道，你所有的贡献与努力都是不会被永远忽略的。
　　9.不要忘记工作的满足感来自一贯的表现，因此要不断充实自己的专业知识，为公司整体利益做出直接贡献。
　　10.不要将个人的情绪发泄到公司的客户身上，哪怕是在电话里。在拿起电话前，先让自己冷静一下，然后用适当的问候语去接听办公桌上的电话。
　　11.不要一到下班时间就消失得无影无踪，如果你未能在下班前将问题解决好，那你必须让人知道。如果你不能继续留下来帮忙，那你应于抵家后打电话回公司看看事情是否已得到控制。就算是平常的日子，在离开公司之前，向你的主管打声招呼也是好的。
　　12.不要滥请病假，应考虑到自己缺席给他人带来的影响，如真的需要请假，请一定如实申报。
　　13.不要提交一份连你自己都不想收到的报告，更不要言之无物，因为你不只有填写报告的义务，同时也有提出改善意见的责任。
　　14.不要言而无信，否则会让所有与你工作上有关系的人都生活在惶恐之中。
　　15.不要只是一味等候或按照别人的吩咐做事，觉得自己没有负上责任，因此出了错也不用受到谴责。这样的心态只能让人觉得你目光短浅，并永不将你列为升迁之列。
　　16.不要在工作时间打私人电话，电话亭就在街边500米的地方，休息时间走出去，虽然要付出两枚硬币，但你的形象却不受损。
　　17.冒领功劳等于制造敌人，若你因一个不属于自己的成绩而受到称赞，那么你就坦白地讲出来。
　　18.不要在上司说些不好笑的笑话时开怀大笑，应明白上司需要一个有创意、有热忱的工作者远远胜过一个应声虫。
　　19.不要把办公室家庭化，这是不专业的表现，也是侵犯公司领地，更何况公司的客户没几个人愿意知道你的家庭是什么样。

 

 

 

这世间，太少的相濡以沫，太多的相忘江湖

    背景里王菲浅吟低唱着这个句子的时候，阿朱如花的笑靥正在青石桥旁小镜湖边渐渐枯萎，乔峰在滂沱的夜雨中泪雨也滂沱。你给我保护，我还你祝福。你英雄好汉需要抱负，可你欠我幸福，拿什么来弥补。终是塞上牛羊空许约。

     空许约，空许约，幸福永远未完成。

     陈家洛不愿负天下人，便负红颜。一个为他香消玉殒，一个因他寂寞余生。也许他的命运早已是注定，在那条命定的路上，没有预设爱情，也没有预设幸福。

     张无忌放弃了江湖与江山，他把幸福给了赵敏，却把牵挂给了小昭，把漂泊给了蛛儿，把憾恨给了芷若。

 
   杨过和小龙女最终做了神仙眷侣。也许他知道，也许他不知道，也许他装作不知道，程英和陆无双为他负尽青春抛尽韶华，郭襄为他天涯思君念念不忘；也许
他记得，也许他不记得，曾经有一个叫公孙绿萼的姑娘把一生停驻在他一刹那的目光里。而他所能给的，也只能是一曲清萧、三枚金针或者某一刻的眷顾而已。

     这世间，太少的相濡以沫，太多的相忘江湖。

 
   我们曾经深深地爱过一些人。爱的时候，把朝朝暮暮当作天长地久，把缱绻一时当作被爱了一世，于是承诺，于是奢望执子之手，与子携老。然后一切消失
了，然后我们终于明白，天长地久是一件多么可遇而不可求的事情，幸福是一件多么玄妙多么脆弱的东西。也许爱情与幸福无关，也许这一生最终的幸福与心底最深
处的那个人无关，也许将来的某一天，我们会牵住谁的手，一生细水长流地把风景看透。

     其实承诺并没有什么，不见了也不算什么，所有的一切自有它的归宿。我们学着看淡，学着不强求，学着深藏，把你深深埋藏，藏到岁月的烟尘企及不到的地方。

     只是，只是为什么在某个落雨的黄昏，在某个寂寂的夜里，你还是隐隐地在我心里淡入、淡出；淡出、淡入，拿不走，抹不掉。

被国人误传了几千年的八句俗语

1、“嫁鸡随鸡，嫁狗随狗”，原为“嫁乞随乞，嫁叟随叟”意思是一个女人即使嫁给乞丐或者是年龄大的人也要随其生活一辈子。随着时代的变迁，这一俗语转音成鸡成狗了。

　　2、“三个臭皮匠，顶个诸葛亮”，“皮匠”实际上是“裨将”的谐音，“裨将”在古代是指“副将”，原意是指三个副将的智慧合起来能顶一个诸葛亮。流传中，人们将“裨将”说成了“皮匠”。

　　3、“不见棺材不落泪”，本是“不见亲棺不落泪”，并不是见了任何棺材都落泪。讹变为“不见棺材不落泪”，如果不管谁的棺材，只要见到就落泪，那就有点太莫名其妙了。

　　4、“有眼不识金镶玉”，本是“有眼不识荆山玉”。荆，指古代楚国；“荆山玉”，是玉匠在荆山发现的玉。

　　5、“不到黄河心不死”，本是“不到乌江心不死”。乌江，项羽他老人家自刎的地方。乌江讹变成黄河，真是让人无从解释了。

　　6、“舍不得孩子套不住狼”，本是“舍不得鞋子套不住狼”意思是要打到狼，就要不怕跑路，不怕费鞋。不过这个我还能理解点，因为好像四川那边管鞋叫孩子。如果真的拿活生生的孩子去套狼，也太恐怖啦！

　　7、“狗屁不通”，这个成语最初是“狗皮不通”。狗的表皮没有汗腺，酷夏，狗要借助舌头来散发体内的燥热。“狗皮不通”就是指狗的身体这个特点，“屁”是污浊的象征，对于文理不通的东西，以屁来喻，也就将就吧！

　　8、“王八蛋”这是民间的一句骂人话。实际上，这句话的原来面目是“忘八端”。古代“八端”是指“孝，悌，忠，信，礼，义，廉，耻”，此八端指的是做人之根本，忘记了这“八端”也就是忘了基本的做人根本，可是后来却被讹变成“王八蛋”。

考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量

一、原理
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250
在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm
波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min
左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford
建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1
000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
二、材料、主要仪器和试剂
1．实验材料
新鲜绿豆芽
2．主要仪器
（1）分析天平、台式天平
（2）刻度吸管
（3）具塞试管、试管架
（4）研钵
（5）离心机、离心管
（6）烧杯、量筒
（7）微量取样器
（8）分光光度计
3．试剂
（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。
（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。
（3）乙醇
（4）磷酸（85％）
四、操作步骤
1．标准曲线制作
（1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。
表1 低浓度标准曲线制作

（2）0~1 000μg／mL 标准曲线的制作：另取6 支10mL 具塞试管，按表2 取样。其余步骤同（1）操作，做出蛋白质浓度为0~1 000μg／mL 的标准曲线。
表2 高浓度标准曲线制作

2．样品提取液中蛋白质浓度的测定
（1）待测样品制备：称取新鲜绿豆芽下胚轴2g 放入研钵中，加2mL 蒸馏水研磨成匀浆，转移到离心管中，再用6mL
蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，放置0.5~1h 以充分提取，然后在4 000r/min
离心20min，弃去沉淀，上清液转入10mL 容量瓶，并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。
（2）测定：另取2 支10mL 具塞试管，按下表取样。吸取提取液0.1mL（做一重复），放入具塞刻度试管中，加入5mL 考马斯亮蓝G-250
蛋白试剂，充分混合，放置2min 后用1cm 光径比色杯在595nm
下比色，记录光密度OD595nm，并通过标准曲线查得待测样品提取液中蛋白质的含量X（μg）。以标准曲线1 号试管做空白。

五、结果计算

式中：X 为在标准曲线上查得的蛋白质含量（μg）。
六、附 注
1．Bradford 法由于染色方法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。
2．有些阳离子，如K+、Na+、Mg2+、(NH4)2SO4、乙醇等物质不干扰测定，但大量的去污剂如TritonX-100、SDS 等严重干扰测定。
3．蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合的反应十分迅速，在2min 左右反应达到平衡；其
结合物在室温下1h 内保持稳定。因此测定时，不可放置太长时间，否则将使测定结果偏低。

包涵体表达小技巧

包涵体表达小技巧之一：快速增值和收获包涵体

看到这么多厉害的技术，只能感慨自己落后了，写点常规基本技术充充门面吧。
关于包涵体蛋白表达，菌种BL21（DE3），质粒PET41，双抗，内藏目标蛋白X。

牛牛菌种的获取：100ml LB液体培养基，加入2-5倍于常规的抗生素量，再1：50加入已经转入质粒的菌种，220 rpm
37度，转啊转，转法是，选择底部有凹凸的瓶子，或者把你的瓶子倾斜（水平夹角约70度），目的是保证转的过程中培养基溶解大量空气进去（有泡沫为证），
我发誓，它们喜欢这个。当培养基的OD600达到0.5或略低于0.5（摇之前做好对照啊），收菌，做成含30%-50%甘油的储备菌，-80保存。这种菌，由于培养基抗生素含量高，所以都是“摔打”出来的，而且还处在对数期，为年轻一代，故称牛牛菌种。选一个无聊的上午接菌，晚饭前就有甘油菌了。

表达开始在一个慵懒的上午，早上8、9点，手持你的甘油菌快速解冻，1：100加到100ml 含有正常量抗生素的LB液体培养基中（不用超标加抗生素了），220 rpm 37度，注意还是要溶解很多空气进去，保证它们喜欢。

2个到2个半小时后，也就是11点左右，把你唤醒的菌种1：100接到你的大瓶培养基中（常规抗生素含量），此时你的牛牛菌依旧年轻奔放而活力四射，依旧220 rpm 37度，保证要有大量泡沫，然后你可以去吃饭和睡午觉了，当然，别忘了把诱导剂拿出来放在4度化冻。

2小时或2个半小时后，也就是1点到2点之间，你的菌液OD600已经可以达到了0.5-0.6了，此时加入诱导剂，比如IPTG，诱导3小时，依旧是快摇，保证有大量泡沫，哦，诱导时盖子要有缝隙，保证外界空气能进去。放心，有抗生素和优势菌在，外面的菌进去活不长。

5点到5点半，收菌，4度10000 G 离心10 min，弃上清得到沉淀。

此时你有几种选择，第一，把菌冻起来回家吃晚饭，一切明天再说；第二，吃完晚饭过来，不嫌麻烦的话用预冷的PBS重悬菌，再离心以去除某些杂质（反正我是
不做这一步的）；第三，把装菌的离心管扔到液氮里，再拿出来室温化冻，加入你用的裂解液（根据Novagen的建议），然后放到摇床上200 rpm
摇10 min，裂解液就可以把菌块全化了。

如果你迫不得已或者打算餐后做消食运动，可以进行菌液的裂解。要不然就留给明天吧。

在这里强烈推荐Novagen的BugBuster Mix，很好用，参照它的说明就可完成裂解。不足之处是贵了点。

Lysis A 裂解液配方：50 mM Tris.Cl，5 mM EDTA，150 mM NaCl，0.5% TritonX-100，0.5%去氧胆酸钠，pH 8.0 （这个配方也许源于分子克隆，但是自己想当然配的，没看分子克隆）。
Lysis B 裂解液配方：50 mM Tris.Cl，150 mM NaCl，0.5% TritonX100，pH 8.0。

Lysis A 一般是1g湿菌加入10-20ml 裂解。

此时你有两个选择，第一，超声波破碎菌体（我从不玩机械破碎）；第二，加入终浓度25-30 U/ml 的Benzonase和终浓度为1KU/ml 的rLysozyme，37度摇床30min。实际上，我经常画蛇添足地先超声再加酶摇。

4度16000 G 15 min，得到沉淀。

重悬沉淀用Lysis B，无论你想用涡旋还是吸管吹，都没问题，加多少LysisB 也没影响，只要能悬散就行，如果不放心，还可以加入rLysozyme或者Benzonase，浓度同上，室温或37度晃荡10min。

为何用Lysis
B？嗯，如果你的下游实验是IMAC，大概不希望EDTA螯合你的柱子上的金属离子，而且，剔除作为阳离子去污剂的去氧胆酸钠也没什么坏处。当然，可以用
无EDTA的蛋白酶抑制剂替代EDTA，然后不加去氧胆酸钠，那么你就只需要一种类似于BugBuster的裂解液了。当然，我不知道BugBuster
的配方，也不想另加蛋白酶抑制剂。

用重悬后的沉淀可以10000 G离心10min后再用LysisB重悬，这个步骤可以做3次，然后用PBS重悬一次（PBS量可以大一点，以充分稀释TritonX100），16000 G 15 min，得到的就是包涵体了。

到这里可以冻上，也可以加进变性液变性，无论6M盐酸胍或8M尿素，带上0.2M磷酸盐或者参照分子克隆配方，但保证pH8.0为宜。感觉变性液吹不散包
涵体的话，可以超声（大功率、间歇）打散包涵体，放心，三四百瓦特的功率打不碎蛋白，只会打烂核酸。你可以让它37度摇1小时到3小时，或者室温、4度之
类过夜，有变性剂在，你的蛋白很安全。

包涵体表达小技巧之二：机器玩重折叠

以Ni柱结合His为例，市售Sepharose柱子或者NTA都行，差别是，NTA有更多的金属离子结合位点，理论上说能结合更多蛋白，而且NTA能承受的压力上限要高一些。这里的重折叠过程不太适合超滤的步骤，仅针对IMAC。

柱子结合Ni可参照说明书，结合后，建议将水洗过程换成复性液洗涤，复性液配方为：8M尿素或者6M盐酸胍，0.2M醋酸，pH4.0。酸性条件不利于蛋白上柱，所以洗一次就行，剔除结合未稳的Ni和柱子表面可能有的杂质，然后加入你用的变性液洗涤平衡柱子，使柱子适应pH8.0的环境。不过千万别总把柱子泡在变性液里。

加入变性好的蛋白溶液，室温1小时振荡结合即可，不要太剧烈，保证柱子不沉下去就行。

我们在使用超滤时，往往无法避免蛋白在重折叠过程中发生聚集的情况，所以加入DTT以防止S-S的形成。而对于上柱的蛋白，优势在于，可以直接在柱子上重折叠，而不必担心蛋白间形成聚集沉淀，缺点就是不能大量生产。

以机器纯化为例，使用FPLC或者AKTA。

变性液（A），重折叠液（B），重折叠液即为剔除了变性剂的A。

N种方案，捡几种来说。

A液为起始100%，B液为终末100%，逐渐用B液完全替代A液，对20ml 以内Ni柱，设总体积300毫升洗涤，流量为0.8ml/min，压力上限对NTA为0.5，对Sepharose为0.3，其实实际运行中很少超过0.1。

在开始你会看到屏幕上UV值暴涨，那是因为很多未结合和结合不稳的蛋白被洗脱，里面有目标蛋白也有杂蛋白，不用管，1小时后UV值就会下降到一个恒定值。
这个过程会持续约6小时，随后可以看到B液浓度开始走水平，表明过柱的已经是100%的B液了。不要急着收，让其再运行30min。这时目标蛋白就完成了重折叠。可以参考常规洗脱办法了。

注意在这个方法中，不含有任何还原剂，如DTT或2巯基乙醇或者还原型谷胱甘肽，仅有变性液含有变性剂，仅有洗脱液含有咪唑（500mM），全部剔除甘油。所需液体仅三种：变性液、重折叠液、洗脱液。如果觉得配置6M盐酸胍或8M尿素是一种痛苦，以上步骤不失是一种简单实用的技术。当然，整个过程最好在4度，最起码也得用冰水不间断流过柱子外围，保证纯化的蛋白具有活性。一般认为，8M尿素在4度会析出结晶，所以推荐6M盐酸胍，实际上，由于整个过程液体都在流动，8M尿素不会析出，它仅仅比盐酸胍在静止状态下容易析出，两者析出特点的区别仅仅在于尿素在4度会更短时间就析出，而盐酸胍花的时间更长。

两个建议：
一、重折叠液可以是pH8.0，也可以是pH6.0这样的酸性，根据你的蛋白最后要的工作条件。如果你的蛋白需要在弱酸性条件或中性条件下工作，建议将重折叠液调为pH6.0，然后洗脱液和透析液也是pH6.0。如果重折叠液是pH8.0，洗脱液是pH6.0，一些天生具有聚集特性的蛋白可能在透析时发生小范围聚集，但会让人很不爽。pH6.0的重折叠液也有缺点，就是蛋白容易在重折叠过程中损失一些，因为弱酸性条件并不利于His挂Ni柱，但这个损失很少，相反可以洗掉很多非特异蛋白。有一些老式步骤中使用低浓度咪唑（比如10 mM）来剔除非特异结合，结果是一样的。

二、这个重折叠可以设定为总量400ml，流速0.5ml/min，那么晚饭后做上就可以回家睡大觉了，第二天早上再来洗脱，不过确保过夜的液体得够啊。

包涵体表达小技巧之三：手工玩重折叠

手动步骤是无法使用机器的下策。

所有液体配方同机器纯化方案，但重折叠过程略作修改。

A液洗涤数次，直到你感觉行了，一般是3-5次，每次5倍柱体积，洗涤过程最好是4度摇床缓慢振荡，以不使柱子沉淀的强度为宜，每次2min足矣。每次洗了都要低速离心（1000 G 5min），弃上清。

设N个梯度，每个5倍柱体积，A:B体积比分别为：10/0，9/1，8/2……1/9，0/10。依次洗下来以使B液缓慢替代A液。每次洗同样是4度轻振荡2min，5倍柱体积，然后低速离心弃上清。最后还要用100%的B液洗两次，保证干净

关于pH值，与机器洗涤方法同样。

一些额外的建议：
一、以His标签为例，如果你感觉6x
His标签会影响下游试验，那么分析你的蛋白序列，如果自带10个以上His，不妨在构建质粒时选没有标签的载体，一样可以很好结合，只是要保证手动洗涤时不会剧烈振荡。如果你担心蛋白自身的His结合柱子之后会影响重折叠，实际上要是带了His标签的蛋白也是无法保证结合柱子的都是标签的蛋白，而且根据我手上的FTIR结果，利用蛋白自身的His结合后得到的重折叠蛋白依旧是类似天然构象。

二、如果无法保证在4度完成重折叠和洗脱过程，那么就按原始方案保留A、B液和洗脱液中的甘油。不过透析液中最好不要有甘油。

三、透析之前，务必清楚自己的透析袋的MWCO值，别把目标蛋白透出去了。以上步骤得到的蛋白透析过程相对简单，加进100倍蛋白体积的透析液，4度透析1-3小时，再换100倍体积新透析液透析4小时或者过夜就行了。如果不放心里面的咪唑，还可以多透一两次。

强调：透析液最好不要是dd水，而是缓冲液。可以根据自己的下游实验自行设计透析液。但是最好不要带有下游实验反应缓冲液中不存在的成分。比如，你的下游试验如果是蛋白相互作用，而缓冲液不含钾离子，那么透析液也就不要含钾离子。

该方法同样适用于GST之类标签的需要重折叠的蛋白。透析后的蛋白若感觉浓度不够可以用超滤管浓缩，同样务必注意超滤管的MWCO……

包涵体表达小技巧之四：柱子回收与再利用

勤俭持家是中华民族的传统美德，如果你想节约自己的柱子，就和胖胖一起玩柱子回收吧。

以市售Sepharose（常用的所谓Fast Flow）和NTA柱子为例。

洗脱蛋白后的柱子，实际上还是很脏，N多杂质在上面，还有很多目标蛋白，算了，洗不下来就忍了。

步骤：
10倍柱体积0.5M NaOH洗柱1次，弃上清；
10倍柱体积水洗1-2次；
5倍体积复性液（6M盐酸胍或8M尿素，0.2M
醋酸，pH4.0）洗柱一次。PS：一般NaOH洗后有棕色沉淀，而复性液洗后有白色沉淀，都是乱七八糟的蛋白——实际上，pH4.0条件会让蛋白掉下来，推理到纯化过程的洗脱一步，如果你不想用咪唑置换His，那不妨用pH4.0的洗脱液，如果你的蛋白不怕酸的话。
10倍柱体积水洗1-2次；
到这里，你的柱子可以再经20%乙醇或0.5M NaOH洗一次，就可保存到相应的保护液里面了。如果柱子已经经历了3次蛋白纯化，那么可继续进行下面步骤。

水洗后的柱子加入2倍柱体积0.2%SDS洗1次；
10倍体积水洗1次以去除SDS；
2倍体积25%乙醇洗1次；
2倍体积50%乙醇洗1次；
2倍体积75%乙醇洗1次；
5倍体积100%乙醇洗1次；
2倍体积75%乙醇洗1次；
2倍体积50%乙醇洗1次；
2倍体积25%乙醇洗1次；
10倍体积水洗1次；
5倍体积100 mM EDTA洗1次，这时柱子应该恢复成白色，因为金属离子被螯合了。
10倍体积水洗1-2次，完全去掉EDTA；
加入你用的金属离子重新结合柱子，室温1小时够了；
10倍体积水洗1次，以去掉没结合的金属离子；
5倍体积复性液洗1次；
到这里，再用你柱子保存液洗柱1次就可以把柱子保存起来了。
到了该让蛋白结合柱子的时候，可以再拿复性液洗1次，然后变性液洗1-2次，让柱子适应了pH8.0的变性环境，就可以加入蛋白变性后的溶液了。

对于用His结合柱子的蛋白，不推荐使用还原剂如DTT、2巯基乙醇或还原型谷胱甘肽，如果你的蛋白很大（>100kDa），可以在变性时少量加入还原剂，但还原剂影响蛋白结合柱子。要用就用稳定的2巯基乙醇，如果下游要注射到动物或上细胞，也不必害怕2巯基乙醇的毒性，因为整个纯化洗脱透析过程已经把最开始的那点东西踢得干干净净了

节约型社会是和谐社会的基本特征之一