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Monthly Archives: 2月 2009

[Merck推荐]原核表达秘笈之宿主菌株选择指南

 

      在原核蛋白表达过程中,选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素:表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以获得最满意的表达效果。事实上,在平时的实验中,最容易被忽视的就是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株,或者是载体配套的菌株,而不去追究原因——即使表达结果不佳,大多在表达条件和载体上找原因,也不会考究菌株的选择是否适合。

    作为原核表达的宿主,对外源基因的表达会产生一定的影响,是勿庸置疑的。每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂,按照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的,当出现问题时,我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢?

    知其然还要知其所以然。比如,菌株内源的蛋白酶过多,可能会造成外源表达产物的不稳定,所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21系列就是lonompT蛋白酶缺陷型,也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因,为T7表达系统而设计。

    真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同,因此,在用原核系统表达真核基因的时候,真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子,从而导致表达效率和表达水平很低。改造基因是比较麻烦的做法,Rosetta 2系列就是更好的选择——这种携带pRARE2质粒的BL21衍生菌,补充大肠杆菌缺乏的七种(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 及CGG)稀有密码子对应的 tRNA,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。(已经携带有氯霉素抗性质粒)

    当要表达的蛋白质需要形成二硫键以形成正确的折叠时,可以选择K–12衍生菌Origami 2系列thioredoxin reductase (trxB) 和glutathione reductase (gor)两条主要还原途径双突变菌株,显著提高细胞质中二硫键形成几率,促进蛋白可溶性及活性表达。(卡那霉素敏感)

Rosetta-gami™ 2则是综合上述两类菌株的优点,既补充7种稀有密码子,又能够促进二硫键的形成,帮助表达需要借助二硫键形成正确折叠构象的真核蛋白。(卡那霉素敏感)

Origami B是衍生自 lacZY突变的 BL21菌株,这个突变能根据IPTG的浓度精确调节表达产物,使得表达产物量呈现IPTG浓度依赖性。(四环素敏感)

    在决定试用这些名字古怪的菌株时,有几个小Tips要注意的,一个是不同菌株有时已经携带某个质粒或者已经具有某种抗生素抗性,要注意自己的表达质粒是否能与之兼容。比如Rosetta 2 已经携带有氯霉素抗性质粒,不能再用氯霉素筛选等等。

现象

可能原因

改进方案

建议菌株

无蛋白表达

E. coli 的密码子偏移性

补充稀有密码子的tRNA;将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子

Rosetta 2

Rosetta-gami 2

Rosetta-gami B

RosettaBlue

出现截短蛋白

包涵体

二硫键形成困难

降低宿主胞质的还原性;利用促进二硫键形成的各种载体标签

Origami 2

Rosetta-gami 2

Rosetta-gami B

表达过快,表达量过高

控制优化表达水平:降温,IPTG浓度优化

Tuner

Rosetta-gami B

蛋白无活性

蛋白错误折叠

降低宿主胞质的还原性;利用促进二硫键形成的各种载体标签

Origami 2

Rosetta-gami 2

Rosetta-gami B

控制优化表达水平:降温,IPTG浓度优化

Tuner

Rosetta-gami B

细胞死亡,生长极困难

毒性蛋白

更严格的本底表达控制

pLysS 菌株

无克隆生长

过高本底表达

更严格的本底表达控制

pLysS、pLysE 菌株

 

重组质粒和菌株的保存建议

        在实验室里保存重组菌株的时候,为了挑菌和传代方便,我们常用LB平板保存在4℃冰箱中,需要提质粒和表达接种的时候,就直接从平板上挑菌,但是这种方法对于重组质粒的稳定性不利,容易出现质粒丢失、表达水平不稳定、菌株退化乃至发生污染等情况。 我们建议:

        1、 长期存放菌株和pET重组子应该存在甘油-70℃保种。但是要注意高浓度甘油(> 10%)会导致质粒不稳定。请尽量保持甘油浓度8%。(15%浓度的甘油保种液和新鲜菌液1:1就行)

        2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株(带DE3的大肠杆菌)中,请尽量使用带有recA endA突变的克隆菌株(比如C600,DH5a)进行质粒抽提和保存质粒。表达型的菌株提质粒经常会有质量不高或者背景的问题。特别是大量抽提。(生物通改编)

    其实不仅仅是表达,建库克隆都会涉及菌株的不同要求,推荐看看以下文章:克隆/建库专用超级高效感受态细胞 。感受态不是目的,菌株的背景才是关键。

 

文章来源: 生物网

世上最毒的五种植物

 
蓖麻子

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  蓖麻子植物,或蓖麻,是一种被广泛栽培的植物,其可提取蓖麻油,也可作为观赏植物。这两种作用都不可能使你得出一个结论,即这种植物含有致命的成份:蓖麻毒蛋白。蓖麻油是一种味道温和的植物油,用在许多食品添加剂,香料和糖的生产中。它也可作为泻药和起减轻疲劳的作用(虽然没有科学证据表明它确实能减轻疲劳) 。
  蓖麻子可能起源于非洲,但现在发现世界各地都有。因为它耐寒的性质,这种大型的灌木植物普遍在园林中使用。即使在贫瘠的地区,它也生长得很好,而且不需要特别照顾。蓖麻花是黄绿色的,花的中心是红色的。叶子大而且呈锯齿状边缘。
  蓖麻毒素在蓖麻中的含量算是少的,主要集中在种子壁上。种子中毒是罕见的,小孩或动物有时会沾惹上,一旦沾惹,那可是致命的。它的种子呈褐绿色,只要三粒种子,就可以让吞食它的小孩毙命。
  蓖麻子中毒症状包括恶心,腹痛,呕吐,内部出血,肾脏和体液流通不畅。许多人因吸进含有蓖麻子的灰尘而出现过敏反应,可能会出现咳嗽,肌肉疼痛和呼吸困难等症状。在豆类加工用于商业用途的地区,因粉尘中毒是常有的事。在古代,蓖麻子用作药膏。据说,埃及最后一位女王克娄巴特拉用蓖麻涂在白眼部分,使眼睛看起来更明亮。

颠茄
  

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颠茄学名Atropa belladonna L.。多年生草本植物。全草入药。原产欧洲中、南部及小亚细亚。20世纪30年代引进中国。株高1-1.2m。叶互生,叶片广卵圆形或卵状长圆形,全缘,叶表面呈蝉绿色,背面灰绿色。花冠钟状,淡紫褐色。浆果球形,成熟时黑紫色。种子多数,褐色,小而扁,呈肾形。花期6月至8月。果熟期8月至10月。喜温暖湿润气候,怕寒冷,忌高温,以20-25℃的气温生长快,超过30℃生长缓慢。雨水多,易患根病。
  在其叶、果实和根部含有含毒性成分颠茄生物碱,包括莨菪碱等。当它成到2至4英尺( 0.6至1.2米)高的时候,毒性最强,这时候它的叶子显深绿色,花为紫色钟型状。浆果为甜味多汁,经常会迷惑儿童食用。在土壤丰富、水分充足的地方生长茂盛,在世界一些地方大量存在,而在美国,仅看到有人工种植的颠茄,野外几乎没有它的踪影。虽然它对人类和某些动物是致命性的,但是令人惊奇的是,并非所有的动物吃了它都会中毒,马、兔和羊吃了它的叶子相安无事,鸟类吃了它的浆果也不见丧命。
  颠茄里面的致命毒素,如果吸入足够的剂量,将严重影响影响到中枢神经系统,这些毒素神不知鬼不觉地麻痹侵入者肌肉里面的神经末梢,比如血管肌,心脏肌和胃肠道肌里面的神经末梢。致命的中毒症状包括:瞳孔放大,对光敏感,视力模糊,头痛,思维混乱以及抽搐。两个浆果的摄取量就可以便一个小孩丧命,10至 20个浆果会杀死一个成年人。即使砍伐它,都要小心翼翼,以免会引起过敏症状。

鸡母珠

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  鸡母珠 ,学名为Abrus precatorius L,属于豆科,鸡母珠属。别称相思子、红珠木、鸡母子、鸡母真珠等。结出来的种子非常漂亮,为椭圆形,种子三分之二为红色,顶部三分之一为黑色,种子可用于装饰用途,经常被制成首饰,受到很多人的喜爱。这种首饰在一些宗教国家非常重要,因为那里的人们把它当作念珠来使用。
  鸡母珠喜欢生长在开阔、向阳的河边、海滨、林缘或荒地。鸡母珠生长性非常强,如果不加控制,它甚至可以排挤占据其它植物的生存空间,成为该地的领主。鸡母珠原产于印尼,现已经遍布世界各地热带和亚热带地区,甚至在美国的阿拉巴马州、阿肯色州、佛罗里达州、佐治亚州和夏威夷都可以发现它的踪影。
  种子含有鸡母珠毒蛋白,种子外壳较硬,当涂层弄破时才有危险性,误食无破损的种子不易中毒。但是如果种子被刮伤或损坏,对人的危害将是致命性的。所以制造这种首饰的人面临的危险性要远远高于佩戴的人。有关制造者在处理首饰时因刺伤手指而毙命的报道经常见于各报端。鸡母珠毒蛋白比蓖麻毒蛋白更具致命性,吸入不到3微克的鸡母珠毒蛋白就可以使人丧命,而1颗鸡母珠豆的含毒量要大于3微克。它破坏细胞膜,阻止蛋白质的合成,让细胞最重要的职责不能够完成。吸入后中毒的症状为:在数小时至一日内出现食欲不振、恶心、呕吐、肠绞痛、腹泻、便血、无尿、瞳孔散大、惊厥、呼吸困难和心力衰竭,严重的呕吐和腹泻可导致脱水、酸中毒和休克,甚至出现黄疽、血尿等溶血现象,一般因呼吸衰竭而死亡。尸检可见胃和肠内大面积溃疡及出血。该物种为有毒植物,其毒性为种子剧毒,叶和根次之。而一粒果仁即可使人致死各种动物对相思子的毒性有不同的敏感性,如60g种子可使马致死,而同样剂量对牛、羊和猪却不会引起死亡。

水毒芹

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  水毒芹(英文名为: Water hemlock),水毒芹分布广泛,它原产于北美洲,属于伞形科植物。水毒芹平均高为0.6-1.3米,可以长到1.8米高。气味令人难受,有毒,其毒性更甚于毒芹。水毒芹多生于沼泽地、水边、沟旁、湿草甸子和林下湿地处。
  很多人把它误认作荷兰防风草,从而犯下潜在的致命误食错误,水毒芹全身都含有一种毒素做毒芹素,但是这种毒素主要集中在要根部位置,对于任何把它当成荷兰防风草而误食者,都将面临迅速死亡的危险。被很多人认为是北美洲最致命的植物。主要有毒成分为毒芹碱、甲基毒芹碱和毒芹毒素。毒芹碱的作用类似箭毒,能麻痹运动神经,抑制延髓中枢。人中毒量为30-60毫克,致死量为120-150毫克;加热与干燥可降低毒芹毒性。毒芹毒素主要兴奋中枢神经系统。水毒芹所含有的毒芹素,食后不久即感口腔、咽喉部烧灼刺痛,随即出现胸闷、头痛、恶心、呕吐,吐出物有鼠尿样特殊臭味,乏力、嗜睡;继则四肢无力,步履困难,痉挛,肌肉震颤;四肢麻痹(先下肢再延及上肢),眼睑下垂,瞳孔散大,失声,常因呼吸肌麻痹窒息而死。致死期最短者数分钟,长者可达25小时。即使幸运生存下来,也将面临长期的亚健康状况困扰,比如患上失忆症等等。

夹竹桃

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  夹竹桃被许多人认为是世界上毒性最强的植物,夹竹桃所有的部位都含有毒性,而且的不是单一的毒性,它美丽的外表之外蕴含着多种毒性。其中夹竹桃甙、糖甙是其中毒性最强的两种,它们对动物的心脏具有很强的伤害作用。夹竹桃的毒药是如此强大,实际上,人吃了蜜蜂采集过夹竹桃花所酿造蜂蜜,都可以中毒。夹竹桃是一种吸引人的植物,尽管其具有致命性的名声,人们仍然喜欢种植它来达到装饰的目的。它原产于远东和地中海地区,但现今已经被引种到世界各地,夹竹桃容易生长,在土质较差和天气干旱的地方也能种植。
  夹竹桃是一种矮小的灌木,主干、枝条上有许多分枝,最小的小枝呈绿色。夹竹桃的花有香气。花集中长在枝条的顶端,它们聚集在一起好似一把张开的伞。夹竹桃花的形状像漏斗,花瓣相互重叠,有红色和白色两种,其中,红色是它自然的色彩,“白色”是人工长期培育造就的新品种。
  夹竹桃分泌出的乳白色汁液含有一种叫夹竹桃苷的有毒物质,误食会中毒。新鲜树皮的毒性比叶强,干燥后毒性减弱,花的毒性较弱。人中毒后初期以胃肠道症状为主,有食欲不振、恶心、呕吐、腹泻、腹痛,进而出现心脏症状,有心悸、脉搏细慢不齐、期前收缩,心电图具有窦性心动徐缓、房室传导阻滞、室性或房性心动过速,神经系统症状尚有流涎、眩晕、嗜睡、四肢麻木。严重者瞳孔散大、血便、昏睡、抽搐死亡。动物中毒症状与之类似,牛中毒后,重者皮肤冷厥、瞳孔散大、食欲及反刍停止、心悸亢进、下痢、脉速、突然死亡。叶及茎皮有剧毒,人畜误食可致命。夹竹桃对二氧化硫,氯气等有毒气体有较强的抗性,常被用于高速公路的绿化树种。

教你10指带戒指真正含义

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      据说左手的无名指有一根血管直接与心脏联系,所以新人一定要把结婚戒指亲手戴在对方的左手无名指上。 爱你到心里!情愿为你的爱而受戒!戒指戴在不同的手指有不同的意义呀。

      右手和左手都有不同的意义。右手小指:不谈恋爱。 右手无名指:热恋中。 右手中指:名花有主。右手食指:单身贵族。 左手小指:不婚族。 左手无名指:结婚。 左手中指:订婚。 左手食指:未婚。大拇指都是代表权势的意思,也可以做自信的意思。

      戴戒指是有讲究的。按西方的传统习惯来说,左手显示的是上帝赐给你的运气,因此,戒指通常戴在左手上。

      国际上比较流行的戴法是:食指———想结婚,表示未婚;中指———已经在恋爱中;无名指———表示已经订婚或结婚;小指———表示独身。至于右手,在传统上也有一个手指戴戒指时是有意义的,那就是无名指。据说戴在这里,表示具有修女的心性。

      还有一种戒指,当你戴它的时候,无论你戴在哪里都不具备任何意义,这种戒指就是一般的花戒。这种戒指是起一种装饰的作用,可以戴在任何你想戴的手指上。戒指戴在拇指上是十分奇怪的,因此不推荐。戒指戴在食指上,感觉是比较有个人主张。最正式的戴法莫过于戴在中指上,如果不想有太正式的感觉,可以在左或右指再加一个简单的指环。无名指上的戒指通常是结婚戒指,无名指长得比较纤细,因此不管什么戒指,戴起来都是标准的秀气。

      最新鲜的戴法,莫过于把戒指戴在小指头上了。一枚小小的、简单的尾戒让女性的手莫名其妙地可爱起来,一般代表“我现在只想单身,请不要浪费时间追求我”的意思. 戴设计性比较强的戒指时,如果想更有个人风格,可以考虑搭配另一个材质相同、线条较简单的指环在另一指上。如果戒指的材质属性可以和手表搭配,那是最好不过的了。例如你戴的是枚可爱的花戒指,就可以配一只皮质金框的表。如果你并没有太多可以变换的表或戒指时,不妨考虑把戴戒指的手和戴手表的手错开,不要让不协调的两件配饰在同一只手上出现。在同一只手上戴两枚戒指时,色泽要一致,而且一枚戒指复杂时,另一枚一定要简单。

      此外,最好选择相邻的两只手指,如中指和食指、中指和无名指或无名指和小指,千万不要中间隔着一座“山”。 比较通用的一种说法是: 戴在拇指上表示追(有行动的对对方的追求),戴在食指上表示求(仅限于内心对爱情的渴望),戴中指表示定(正处在恋爱中或已经订婚了),戴在无名指上表示结(已经结婚了),而戴在小指上就表示离(决定单身或离婚了)。在**,不戴戒指也表示“名花还无主,你可以追我”。

      戒指泄露的心底故事,戒指不仅仅是装饰品,你喜欢戴哪一类戒指,喜欢戴哪根手指,都会泄露你的心底故事。对男士来说——.戴纯银戒指表示性情温和,易迁就他人。 戴金戒指者较重视利益,往往会有精明的生意头脑。 戴翡翠玉石者注重品味素质,处事严谨。 对女士来说—— 喜爱粉红钻或粉红色珊瑚者,感情丰富而浪漫。 喜爱红宝石或红碧玺者,热情似火。 喜爱蓝宝石或海蓝宝者.较内向冷淡。喜爱祖母绿或土耳其石者,情感纤弱。 手指与戒指—— 戒指戴在不同的手指上,能体现与性格有关的心理含义。 喜戴在食指者,性格较偏激倔强。喜戴在右中指者.崇尚中庸的人生观念。 喜戴在左中指者,有责任感,重视家庭。

世界优秀大学的硕士与博士论文集

世界优秀大学的硕士与博士论文集,对我们这有一定的帮助。
各位虫友们继续努力啊!
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Australian Digital Theses Program
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M.I.T. Theses and E-Theses Online
https://dspace.mit.edu/handle/1721.1/7582
http://library.mit.edu/F?func=find-b-0
Cornell University Library
http://dspace.library.cornell.edu/handle/1813/39/browse-date
University of Notre Dame
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Unersity of Pretoria, New Zealand
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Theses & Dissertations written in Chinesse (Big5)
http://etd.lib.nsysu.edu.tw/ETD- … rowse_by=department
Vanderbilt University
http://etd.library.vanderbilt.edu/ETD-db/ETD-browse/browse
Eindenburg University
http://www.era.lib.ed.ac.uk/browse-title
Simon Fraser University
http://ir.lib.sfu.ca/browse-title
Digital Journal and ETDs
http://umi.com/products_umi/digitalcommons/
British Library
http://sherpa.bl.uk/view/subjects/
The European Library
http://www.theeuropeanlibrary.org/portal/index.html
Ohio LINK ETDs Search
http://search.ohiolink.edu/etd/
Case Western Reserve University
http://www.case.edu/provost/gradstudies/etd/
Boston College
http://dissertations.bc.edu/
University of Nebraska
http://digitalcommons.unl.edu/dissertations/
University of Maryland
https://drum.umd.edu/dspace/browse-date
University of Connecticut
http://digitalcommons.uconn.edu/dissertations/
Texas A&M University
http://txspace.tamu.edu/browse-date
Nortwestern University
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North Carolina State University
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Georgia Institute of Technology
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NCSU Library
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University of the Free State
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Florida State University
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Universiy of Western Michigan
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Digital Media Library
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University of South Africa
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Virginia Polytechnic Institute
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East Tennese State University
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Georgia Institute of Technology
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Georgia State University
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University of Monitoba
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UNB e-Repositories
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University of Pitsburg
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University of Tennessee
http://diglib.lib.utk.edu/cgi/b/ … d-bib&page=dept
Texas Digital Library
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Texas Tech University
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NTNU
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University of Johannesberg
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Texas A&M University
http://txspace.tamu.edu/browse-title
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Theses Canada Portal
http://collectionscanada.ca/thesescanada/index-e.html
University of Waterloo
http://etheses.uwaterloo.ca/
Networked Digital Library
http://zippo.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon
University of Helsinki
http://ethesis.helsinki.fi/english.html
Caltech Libraries
http://etd.caltech.edu/ETD-db/ETD-search/search
Virginia Tech: Electronic Thesis and Dissertation Library
http://scholar.lib.vt.edu/theses/browse/
University of Florida
http://www.uflib.ufl.edu/etddept.html
Brigham Young University
http://etd.byu.edu/collection.html
Canada Portal Theses
http://amicus.collectionscanada. … =18&l=0&v=1
Pennsylvania State University
http://etda.libraries.psu.edu/ETD-db/ETD-search/search
University of Ohio LINK
http://search.ohiolink.edu/etd/
Western Michigan University
http://etd.wmich.edu/theses/browse/
West Virginia University
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Rhodes University
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Florida State University
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Wake Forest University
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University of Pretoria
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Virginia Commonwealth University
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George Washington University
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Rhodes eResearch Repository
http://www.eprints.ru.ac.za
North Carolina State University
http://www.lib.ncsu.edu/etd
The Humanities Clearinghouse
http://www.etext.lib.virginia.edu/ETD
Worcester Polytechnic Institute
http://wpi.edu/Pubs/ETD/browse/by_department/b.html
University of North Texas
http://www.library.unt.edu/theses
Louisiana State University
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Florida State University
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University of Kentucky
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University of Saskatchewan
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UNC School of Library Science Electronic
http://www.etd.ils.unc.edu/dspace
University of Maine
http://www.library.umaine.edu/theses
Duquesne University Library
http://www.library.duq.edu/etd
University of Virginia
http://www.viva.lib.virginia.edu/etd
Vanderbilt University
http://etd.library.vanderbilt.edu/ETD-db
University of South Africa
http://www.unisa.ac.za/Default.a … amp;ContentID=15350
University of Pittsburgh
http://www.pitt.edu/~graduate/etd
Williams College
http://www.williams.edu/library/theses
Universitatsbibliothek Munchen (Germany)
http://edoc.ub.uni-muenchen.de/perl/advsearch
University of Florida
http://uf.aleph.fcla.edu/F/?func … ;local_base=ufu_etd
University of New Orleans
http://etd.uno.edu/
University of Pretoria
http://upetd.up.ac.za/
University of Puerto Rico
http://grad.uprm.edu/tesisdigitales.htm
UW Electronic Thesis Database
http://etheses.uwaterloo.ca/
Uppsala Universitiet
http://publications.uu.se/theses/
Virginia Commonwealth University
http://etd.vcu.edu/ETD-db/ETD-search/search
Worcester Polytechnic Institute
http://www.wpi.edu/ETD-db/ETD-search/search
Yale University Library
http://ymtdl.med.yale.edu/ETD-db/ETD-search/search
The George Washington University
http://etd-gw.wrlc.org/ETD-db/ETD-search/search
The Pennsylvania State University’s
http://etda.libraries.psu.edu/ETD-db/ETD-search/search
North Carolina State University
http://www.lib.ncsu.edu/ETD-db/ETD-search/search
The New Jersey Institute of Technology’s
http://www.library.njit.edu/etd/index.cfm
Naval Postgraduate School Theses
http://library.nps.navy.mil/uhtbin/webcat
University of Mississippi Rowland Medical Library
http://library.umsmed.edu/free-e_res.htm#Journals
University of Groningen (Nedherland)
http://dissertations.ub.rug.nl/faculties/
NEXUS Data System
http://star.nrf.ac.za/scripts/st … s.txt?action=-oKdpb
Association of African Universities
http://www.aau.org/datad/database/login.php
[user: elfina & password: nasution]
University of Rochester
https://urresearch.rochester.edu/handle/1802/536/browse-title
HKUST Library Hong Kong
http://ustlib.ust.hk/search/ddis … 1%2C2754%2CB/browse
Dissertation Abstracts Online
http://library.dialog.com/bluesheets/html/bl0035.html#XT
Digital Library and ETDs Archives
http://scholar.lib.vt.edu/theses/browse/by_department/
Deakin University
http://tux.lib.deakin.edu.au/adt-VDU/public/
South Western Medical Center
http://www4.utsouthwestern.edu/l … amp;sortBy=dc.Title
Philosophy Dissertations Full Text
https://webspace.utexas.edu/deve … /dissertations.html
Universitat Dorpat (German)
http://www.utlib.ee/ekollekt/vanadisser/
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The University of Auckland
(Dissertations in Statistics Education)
http://www.stat.auckland.ac.nz/~ … s/dissertations.php
Horwitz Consulting PhD Data
http://www.phddata.org/process?action=newsearch
British Library
http://sherpa.bl.uk/view/subjects/
佐治亚理工学院博士、硕士论文
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The European Library
http://www.theeuropeanlibrary.org/portal/index.html
The Guide for Electronic Theses and Dissertations
http://etdguide.org/content/default.htm
Networked Digital Library of Theses and Dissertations
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加州大学的免费文献仓库 
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亲爱的老婆老公的来信

亲爱的老婆:

  你,在娘家还好吗?

  从我们怄气到现在你已经离家出走达38小时零37分钟了,这距离你出走史上的最高纪录还差4个小时零21分种,我知道你在等我向你登门道歉,我也准备这样做,但我更希望你能坚持下去,再创你出走史上的新高!

  我在家里一切还好,请不要惦念。虽然,你带走了存折,不过,你不用担心我的经济来源,因为我手里还有一张附属信用卡。信用卡用起来就是方便,我已经买了五件衬衣,七条内裤和十二双袜子,估计每天一套能穿到你回来了。名牌就是名牌,虽然贵了点……

  我的伙食问题你也不用担心,我已经到七~家新开张的洒楼试吃过了;带鱼,麻杆,猪头三他们怕我一个人孤单,天天陪着我,不过他们尽点好菜好酒,我没办法啦,你知道我死要面子的。最让我心烦的就是对门新搬来的那个女人,差不多每天都来借醋借蒜什么的。不过你放心我是决不会犯错误的,这方面你要对我有信心。至于,家里的花花草草,我想让它们提早适应沙漠化的环境,决不给它们浇水,这有利于它们的物种进化。对了,咱家的咪咪是陪你一起回娘家了吗?我两天没见它了。

  你也不用担心我那两个可爱的小舅子会一时冲动来找我做出什么不理智的事来,昨天我请他们爆搓了一顿,顺便向他们讲了我们之间的一点小事,他们听后拉着我的手哭着说:“姐夫,真是苦了你了!云云”

  我会接你并向你道歉的,不过你在娘家安心地住一段时间也好,‘常回家看看’嘛,老人们也需要你。

  另:如果你明天不回来的话,冰冰约我去吃比萨我就去了,反正闲着也是闲着,老拒绝人家也不好,终究是一个单位的同事嘛。

  再见!

  你亲爱的老公。

  

 

 

亲爱的老公:

  谢谢你的来信!

  我在娘家一切都好,不用挂念。忘了告诉你了,存折上的存款已经转存到了我的帐户,本来我还稍许担心你的经济情况,不过既然你能恶性透支信用卡过得那么滋润,也用不着我担心了。

  另外我做个善意的提醒,家里厨房碗柜最下面还有2包速食面,虽然你现在吃得挺好,不过我还是有些担心,也许当信用卡告罄后而带鱼,麻杆,猪头三他们个个忙的没空见面的时候,你会需要它们。

  替我向对门的新邻居问声好,月底房屋贷款就会到期,到时你就不得不和你的新朋友说拜拜了!对了家里的花你千万别浇水,我种的是仙人掌。咪咪和我在一起,家里的灭害灵早用光了,现在你一定在和小强面面相觑吧。

  我那两个可爱的弟弟当然不会找你什么麻烦,他们一直在劝我离婚,找一个有本事的男人。

  现在才觉得回家的感觉真好,不必每天那么辛苦的洗衣烧饭,可以自由的逛街shopping,真是开心!

  祝你明天和冰冰玩的愉快,另外听说冰冰的新男友是体育学院的拳击教练,也不知道是真是假,你知道我没那么八卦的啦!

  再见!

  你亲爱的老婆

有时候会很喜欢发一些无聊的短信

有时候会很喜欢发一些无聊的短信

当你收到“你干嘛呢”
就等于“我想你了”

发“呵呵”多是没笑或傻笑
但如果我发的是“嘿嘿”“嘎嘎”或者“哈哈哈”这是你打过来我一定是在笑

每次骂你“傻子”“笨蛋”“死孩子”
都是关心 希望你照顾好自己

当多是问句结束时
是希望能在和你多聊一会
相反如果“嗯”“哦”一定是敷衍
在意的人我多会回复“收到”“遵命”“知道啦”之类的

有时催你睡觉或者让你忙自己的
其实心里并不想你真的那么做

把我的糗事 傻事 失落事告诉你
是希望你安慰我 照顾我 甚至骂骂我

主动发给你
一定是你在我心中有很重的分量
我很讨厌和不在意的人啰嗦

喜欢给你起外号的
是我希望可以让你多记住我一些

“我到家了放心吧”“你到家了告诉我一声”
是说明我进屋第一个想到的人是你希望你也如此或者你一定要一路平安我不许你有事

有时实在没话了又想发给你
就会假装发错人
好吧  我承认这很蠢……

有时看到很好的短信会忍不住转发给你
又不忍心 会偷偷把“转发10人会幸福哦”改成“转发2人会幸福哦”
凡是那种“不转发就会有不幸 就会失去爱人 就会家人危险的”
我会坚决不发给你

有一阵没发给你短信过
并不代表我没发出去的草稿箱里没有

还有
我晚上从不关机
就是希望
只要你需要我
我就在这儿

详细的2009年《国家自然科学基金项目申请书》填写注意事项(小节决定成败)

1、请申请者严格按照国家自然科学基金资助计划类别编写提纲要求认真撰写申请书。
2、封面填写——依托单位:XX大学,通讯地址:XXX,邮政编码:XXXXX,单位电话:XXXX。“申请代码”、“资助类别”、“亚类说明”、“附注说明”等内容必须按照《2009年度项目指南》要求填写,否则系统无法受理。因国家自然科学基金项目实行电子网络化管理,以后项目评审意见反馈、项目批准通知、填写资助项目计划书、进展报告、结题报告等均使用申请书中的电子邮箱,故申请者个人电子邮箱一定要准确无误。
3、基本信息:
(1)工作单位请规范填写所在二级单位名称全称,而不要填写到三级单位。
(2)在研项目批准号为在研国家基金项目批准号,其他项目一律不需填写。
(3)预计研究年限:面上、青年项目一般为三年(2010年1月—2012年12月),杰青、重点、重大项目一般为四年(2010年1月—2013年12月)。
(4)项目组成员中有本单位以外的人员(含联合培养和研究生),即被视为有合作单位,必须在合作单位信息表中填写合作单位信息并在签字盖章页上加盖合作单位公章,对于已经在自然科学基金委注册的合作单位,需要加盖单位注册公章;没有在自然科学基金委注册的合作单位需要加盖该法人单位公章,且必须与所填单位名称一致。一般情况下,申请项目的合作单位不应超过2个。如无合作单位,则合作单位信息栏为空白,不要填写“无”。
4、项目组主要成员:
(1)项目组成员合计应与项目组主要成员表内容相符合。职称与学位的填写方面:在读硕士生或博士生的学位不应填写“硕士“和“博士”,应该填写已取得的最高学位,如硕士生学位一般为“学士”,博士生学位一般为“硕士”。在读硕士生和博士生人数不应填入初级或中级职称人数。
(2)注意项目申请者的每年工作时间(月)不少于6个月。
5、经费申请表:请严格按照国家自然科学基金委经费预算标准进行申请!
(1)经费申请表包括两部分内容,即:A.科目栏对应的科目中填写申请经费数以及相应的计算依据与说明;B.本项目相关的其他经费来源栏中填写已从其他渠道得到的项目研究经费。在经费申请表中,A与B经费之间不存在关系。无其他经费来源的情况下,经费总预算等于申请经费合计。请注意金额单位为“万元”。
(2)申请经费内容包括:研究经费、国际合作与交流经费、劳务费、管理费等。
(3)各类项目申请经费的支出内容限额比例如下:
项目类型         国际合作与交流经费        劳务费费        管理费
面上、青年项目         ≤15%         ≤15%        =5%
重点、重大及专项项目        ≤10%        ≤10%        =5%
(4)5万元以上固定资产及设备等,须逐项说明与项目研究的直接相关性及必要性。
(5)仪器设备是指专门用于本项目研究所必需的仪器设备,通用设备不得申请仪器设备费。
(6)协作费不同于合作经费,指用于合作单位以外的协作承担本项目部分、单一研究试验工作的经费,且明确不能是与本单位内部其他学院的协作费。填写时一定要注明协作方的具体单位名称及经费用途。
6、有关申请书报告正文撰写的一些技术性要求,请申请者仔细参阅《2009年度项目指南》和下载的申请书帮助文件。注意正文填写完后,要删除与正文内容无关的提示信息。
7、申请书填写完毕后要做检查保护,否则封面上的有关内容无法打印。申请者应注意:电子申请书每次解除保护和检查保护之后都会改变版本号。为确保纸质版申请书每一页的版本号一致,每次修改后纸质版也应全部打印,不可只打印修改页。
8、申请书中的横向页面请按横向设置打印,并按照页眉朝里、页脚朝外的方向装订。
9、申请者和项目组成员一定要在纸质申请书上签字,不能代签。

揭秘人体二十四小时使用手册

揭秘人体二十四小时使用手册

      6点血压回升,10点效率最高,19点脾气火爆,20点记事最牢

     月有阴晴圆缺,人体的机能状态在一天24小时里同样有规律可循。日前,在接受《生命时报》记者采访时,中国中医科学院西苑医院杨力教授介绍了人体器官24小时工作表。
    1∶00人体进入浅睡阶段,易醒。此时头脑较清楚,熬夜者想睡反而睡不着。
    2∶00绝大多数器官处于一天中工作最慢的状态,肝脏却在紧张工作,生血气为人体排毒。
    3∶00进入深度睡眠阶段,肌肉完全放松。
    4∶00“黎明前的黑暗”时刻,老年人最易发生意外。血压处于一天中最低值,糖尿病病人易出现低血糖,心脑血管患者易发生心梗等。
    5∶00阳气逐渐升华,精神状态饱满。
    6∶00血压开始升高,心跳逐渐加快。高血压患者得吃降压药了。
    7∶00人体免疫力最强。吃完早饭,营养逐渐被人体吸收。
    8∶00各项生理激素分泌旺盛,开始进入工作状态。
    9∶00适合打针、手术、做体检等。此时人体气血活跃,大脑皮层兴奋,痛感降低。
    10∶00工作效率最高。
    10∶00-11∶00属于人体的第一个黄金时段。心脏充分发挥其功能,精力充沛,不会感到疲劳。
    12∶00紧张工作一上午后,需要休息。
    12∶00-13∶00是最佳"子午觉"时间。不宜疲劳作战,最好躺着休息半小时至一小时。